MicroRNA-877在腎癌中的表達及其機制研究.pdf

1、目的:腎細胞癌(RCC)，又稱為腎癌，是一種比較常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，生存率比較低，對放療和化療的治療不敏感，并且極度缺乏臨床早期診斷的腫瘤標記物，且有關(guān)腎癌的的發(fā)病機制并不多，而且機制并不明確。微小RNA(microRNA，miRNA，miR)在人類腫瘤中差異性表達，具有很穩(wěn)定的特性，為腫瘤的診斷和治療提供新的切入點。
　　MicroRNA-877(miR-877)在人類多種腫瘤中差異性表達，然而尚沒有關(guān)于miR-877在腎癌

2、中的表達及作用的研究。本研究旨在檢測miR-877在腎癌患者血液和組織中的表達，并探究miR-877在腎癌細胞中的作用。
　　方法:利用實時定量RT-PCR檢測miR-877在腎癌患者血液、組織及細胞中的表達的表達水平;采用生物信息學預測miR-877的靶基因;利用雙熒光素酶報告基因方法驗證miR-877與靶基因的結(jié)合;利用miR-877模擬物轉(zhuǎn)染腎癌細胞ACHN、Caki-2、769-p和786-O上調(diào)miR-877后，通過MT

3、T、劃痕、信號通路關(guān)鍵分子來探究其在腎癌細胞中的作用;采用免疫組化實驗檢測miR-877的靶蛋白在腎癌組織中的表達。
　　結(jié)果:與健康人對照組相比，腎癌患者血液中的miR-877表達水平下降;腎癌患者癌組織相對與癌旁組織miR-877表達水平下降; miR-877在腎癌細胞系ACHN、769-p及Caki-2低表達;體外功能學實驗表明上調(diào)miR-877可顯著抑制腎癌細胞系769-p、ACHN、Caki-2的增殖和遷移;生物信息學方

4、法預測eEF2K是miR-877的靶基因，雙熒光素酶報告基因方法證實miR-877與eEF2K直接結(jié)合，上調(diào)miR-877可下調(diào)Akt的磷酸化水平及下調(diào)CyclinD1的表達;與其配對的癌旁組織比較發(fā)現(xiàn)，在腎癌組織中eE2F2K的表達較高。
　　結(jié)論:研究顯示在腎癌患者血液、組織以及腎癌細胞系中miR-877明顯低表達，miR-877的靶基因是eE2F2K，miR-877在腎癌中具有一定的抑癌作用。上述發(fā)現(xiàn)表明miR-877具有作