EphA2-EphrinA1在腎癌中的表達及其在轉(zhuǎn)移中的作用機制研究.pdf

1、腎癌是起源于腎小管上皮細胞的惡性腫瘤，占腎臟惡性腫瘤的80％～90％，成人惡性腫瘤的2％～3％。隨著生活水平的提高和醫(yī)學影像學的進步，在早期診斷和早期手術(shù)方面均取得滿意效果。但對于術(shù)后復(fù)發(fā)和伴有轉(zhuǎn)移灶的晚期腎癌患者目前尚缺乏較好的治療方案，臨床上通常以臨床分期和病理分級作為判斷預(yù)后的依據(jù)，有一定的局限性。因此，尋找預(yù)測腎癌惡性程度的生物學標記物，已成為腎癌研究的熱點，以便為腎癌的生物治療提供新靶點和新思路。
　　 促紅細胞生成素

2、產(chǎn)生肝細胞受體（Eph）家族是一類新發(fā)現(xiàn)的酪氨酸蛋白激酶受體（RTKs）。EphA2是其中最早被發(fā)現(xiàn)的一個成員，在正常上皮細胞中表達，廣泛高表達于不同的腫瘤組織（乳腺癌、結(jié)腸癌、食管癌、前列腺癌、惡性間皮癌等）和細胞系。EphA2在正常上皮細胞中位于細胞連接處，配體EphrinA1能以較高的親和力與EphA2結(jié)合，兩者結(jié)合后能導致受體和配體均發(fā)生酪氨酸磷酸化而產(chǎn)生雙向信號傳導，通過其下游信號調(diào)節(jié)細胞正常的生長、發(fā)育，同時也促進EphA2

3、受體自身的降解。在惡性腫瘤細胞中EphA2定位異常，由細胞連接處轉(zhuǎn)變?yōu)閺V泛分布于細胞表面，導致EphA2難以有效的與其配體接觸，因而其自身的降解減少，所以在許多侵襲性腫瘤中EphA2和EphrinA1通常是過表達的。有學者通過一種模擬配體EphrinA1-Fc干預(yù)腫瘤細胞株（PC-3、293、Cos-7），顯示EphA2受體活化、磷酸化程度增強，細胞形態(tài)學發(fā)生變化。因此，EphA2在腫瘤研究中被學者廣泛關(guān)注。
　　 有報道，腎癌

4、組織中EphA2高表達可能與腎癌術(shù)后無瘤生存期有關(guān)，但關(guān)于EphA2及配體EphrinA1相互作用的生物學變化及配受體在腎癌中表達和機制研究國內(nèi)外報道較少。一般認為腫瘤組織類型及惡性程度與疾病的轉(zhuǎn)歸和預(yù)后有關(guān)，在腎癌的不同病理類型中以腎透明細胞癌所占比例較高，為此，本課題通過對EphA2及其配體EphrinA1在腎透明細胞癌組織中的表達及與腎癌臨床病理特征、E-cadherin和微血管密度（MVD）關(guān)系的研究，探討EphA2及其配體Ep

5、hrinA1在腎癌轉(zhuǎn)移中的作用；并通過人工配體EphrinA1-Fc對人腎透明細胞癌786-O細胞系和裸鼠人腎癌細胞移植瘤干預(yù)和治療研究，探討EphA2與配體EphrinA1結(jié)合的生物學效應(yīng)及其抗腫瘤的分子機制，為EphA2/EphrinA1在腎癌中表達及其在腎癌轉(zhuǎn)移中的作用機制研究提供實驗依據(jù)。
　　 第一部分 EphA2/EphrinA1在腎癌中的表達及生物學意義
　　 目的：通過檢測EphA2、EphrinA1在正

6、常腎組織和腎透明細胞癌組織中蛋白和基因表達情況，探討其在腎癌高表達的機制。
　　 方法：采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和流式細胞術(shù)檢測22例腎癌組織和12例非腎癌正常腎組織中EphA2和EphrinA1的基因及蛋白表達情況，并對其進行比較和相關(guān)分析。
　　 小結(jié)：EphA2和EphrinA1蛋白高表達于腎癌組織，其機制除與基因表達上調(diào)有關(guān)外，蛋白質(zhì)生物學異常也可能是導致其升高的重要因素，提示EphA2和E

7、phrinA1蛋白高表達在腫瘤發(fā)病中可能具有重要意義。
　　 第二部分 EphA2/EphrinA1在腎癌轉(zhuǎn)移中的作用
　　 目的：通過對EphA2及其配體EphrinA1在腎癌組織中的表達與腎癌患者臨床病理特征、E-cadherin和MVD的關(guān)系研究，探討EphA2及其配體EphrinA1在腎癌轉(zhuǎn)移中的作用。
　　 方法：利用免疫組織化學法檢測68例腎透明癌組織、24例正常腎組織中EphA2、EphrinA1和

8、E-cadherin的表達；并采用CD34抗體標記微血管內(nèi)皮細胞，計算微血管密度（MVD）。分析EphA2、EphrinA1蛋白的表達與腎癌臨床病理特征、E-cadherin、MVD之間的關(guān)系。
　　 小結(jié)：EphA2和EphrinA1蛋白高表達于腫瘤高分期組、高分級組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，與E-cadherin蛋白表達呈顯著負相關(guān)，與MVD呈顯著正相關(guān)，提示EphA2和EphrinA1蛋白的高表達預(yù)示腫瘤惡性程度的增加，其機制可能通

9、過影響或協(xié)同E-cadherin和微血管生成來實現(xiàn)的。
　　 第三部分 EphrinA1-Fc對人腎透明癌786-O細胞系抗腫瘤效應(yīng)機制的研究
　　 目的：通過人工可溶性配體EphrinA1-Fc干預(yù)人腎透明細胞癌786-O細胞系抗腫瘤效應(yīng)及其分子機制的實驗研究，探討EphA2在腫瘤細胞增殖、轉(zhuǎn)移中的作用及機制。
　　 方法：應(yīng)用可溶性配體EphrinA1-Fc對人腎透明細胞癌786-O細胞系進行體外干預(yù)實驗，觀

10、察不同時間點細胞形態(tài)學的變化，對不同時間點細胞內(nèi)EphA2和ERK1/2的磷酸化程度進行分析，并觀察可溶性配體反復(fù)刺激786-O后的細胞增殖情況。
　　 小結(jié)：EphrinA1-Fc能抑制786-O細胞株的增殖、降低細胞黏附，其機制可能是通過影響胞內(nèi)EphA2、ERK磷酸化實現(xiàn)的。
　　 第四部分 EphrinA1-Fc對裸鼠人腎癌細胞移植瘤的影響
　　 目的：探討EphrinA1-Fc對裸鼠人腎癌細胞移植瘤的影

11、響及其作用機制。
　　 方法：將表達EphA2抗原陽性的人腎透明細胞癌786-O細胞株體外培養(yǎng)后接種于裸鼠皮下，建立動物移植瘤模型，觀察實驗組（瘤周注射EphrinA1-Fc）和對照組（瘤周注射IgG-Fc）移植瘤的生長情況，并采用免疫組化法檢測EphA2、E-cadherin及MVD的表達情況。
　　 小結(jié)：表達EphA2陽性的腎透明細胞癌786-O具有致瘤性，但成瘤率低且成瘤時間長；瘤周注射EphrinA1-Fc可抑

12、制腫瘤細胞的生長，其機制可能通過增加E-cadherin蛋白表達和抑制腫瘤血管生成實現(xiàn)的，反證了EphA2和EphrinA1的高表達可能通過促進細胞增殖、降低細胞與細胞黏附、促進血管生成促進人類腎癌的發(fā)生。
　　 結(jié)論：
　　 1、EphA2/EphrinA1基因和蛋白高表達于腎癌組織。其蛋白高表達的機制可能是自身降解下降、基因表達上調(diào)共同參與的結(jié)果。
　　 2、EphA2/EphrinA1基因和蛋白高表達促進了

13、腎癌細胞增殖、腫瘤新生血管生成，增強了腫瘤細胞與ECM黏附，削弱了細胞間連接，從而促進人類腎癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。
　　 3、人工可溶性配體EphrinA1-Fc能抑制腎癌細胞的生長，為生物靶向治療提供了動物實驗依據(jù)。
　　 4、EphA2和EphrinA1蛋白的高表達預(yù)示腎癌細胞侵襲能力強。聯(lián)合檢測EphA2、EphrinA1和E-cadherin三種蛋白的表達對于評價腎癌的惡性程度、判斷其轉(zhuǎn)移的危險性，可能具有一定的參考價