MicroRNA-150在房顫及急性心梗中的表達及機制研究.pdf

1、近幾年，microRNA（miRNA）在心血管生理及疾病機制中的研究獲得了重大的進步，非編碼RNA在生物學(xué)機理過程中的重要作用目前已經(jīng)取得共識，而miRNAs就是其中的一類，其大約只有22個堿基的RNA序列，通過部分互補結(jié)合信使RNA上的靶位點，調(diào)控蛋白的合成。在心血管系統(tǒng)中，miRNAs已經(jīng)被證實起著重要的作用，它幾乎參與所有和心血管系統(tǒng)相關(guān)細胞的功能調(diào)控，例如內(nèi)皮細胞、心肌細胞、平滑肌細胞，炎癥細胞和成纖維細胞，因此，miRNAs直

2、接參與了很多心血管疾病的病理發(fā)展?；谒鼈冊诩膊≈械淖饔茫芯克鼈儗τ诩膊〉脑\斷、預(yù)防和治療都成為了目前的熱點，然而要使它們進入臨床現(xiàn)在還需要克服許多的困難，本課題主要探討miRNAs在心血管疾病中的診斷以及作用機制。
　　一、血漿中降低的miRNA-150作為潛在診斷房顫的新指標
　　1、基因篩查并驗證miRNA-150在房顫病人血漿中表達降低
　　本課題分別收集5例孤立性陣發(fā)性房顫（PAF）病人血漿、5例孤立性永久

3、性房顫（PersAF）病人血漿和5例正常對照組，運用深度測序技術(shù)篩查出22個miRNAs表達異常，其中miRNA-146a、miRNA-150、miRNA-19a和 miRNA-375符合標準進一步驗證。同時收集90例獨立血漿標本運用探針PCR技術(shù)驗證這4個miRNAs，發(fā)現(xiàn)只有miRNA-150的表達趨勢符合篩查結(jié)果，其表達分別在PersAF病人血漿中及PAF病人血漿中相對于正常對照組下降約17倍和20倍。
　　2、下調(diào)的miR

4、NA-150表達與房顫相關(guān)聯(lián)
　　結(jié)合病人資料和測得的miRNA-150表達值，邏輯回歸分析顯示，降低的miRNA-150表達（優(yōu)勢比OR1.96，95％可信區(qū)間CI1.5~3.57，P<0.001）、年齡（OR1.1，95％CI1.36~2.73，P<0.001）和左房直徑（LAD）(OR1.5，95％CI1.36~1.8，P<0.001)分別為房顫的獨立相關(guān)因素。數(shù)據(jù)庫分析顯示miRNA-150的靶基因中有18個基因與AF相關(guān)

5、，其中11個與炎癥系統(tǒng)有聯(lián)系，炎癥因子不僅可以作為診斷AF的標準，也參與了AF的發(fā)病機理，為此我們探測了病人血漿中C-反應(yīng)蛋白（CPR）的表達水平，發(fā)現(xiàn)其與miRNA-150的表達呈負相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.77）。
　　二、miRNA-150在急性心肌梗死（AMI）中調(diào)控單核細胞功能保護心肌功能
　　1、miRNA-150在AMI后的外周單核細胞中表達下調(diào)
　　收集20例AMI病人外周血和10例正常對照組，磁珠分選出外周血

6、CD14+單核細胞，qRT-PCR測試發(fā)現(xiàn)miRNA-150表達量下調(diào)，而在CD14-的外周單核細胞（PBMCs）中表達無顯著差異。同時建立小鼠心梗模型，從心梗小鼠和對照組中的PBMCs中磁珠分選出CD115+單核細胞，相對于對照組，心梗后單核細胞中的miRNA-150表達顯著下調(diào)，而在CD115-PBMCs中表達無差異。
　　2、miRNA-150調(diào)控人類單核細胞（THP-1）的遷移和炎癥因子的產(chǎn)生
　　體外實驗在THP-

7、1細胞系中轉(zhuǎn)染miRNA-150的擬合物（agomiRNA-150）、抑制劑（antagomiRNA-150）和對照物，遷移實驗發(fā)現(xiàn)高表達組相對對照組阻止了THP-1的遷移（3.7±0.5倍），而抑制miRNA-150組促進了遷移（6.3±0.8倍）。另外，轉(zhuǎn)然后的THP-1給予脂多糖（LPS）刺激，ELLSA測試發(fā)現(xiàn)，相對于對照組高表達miRNA-150組減少了促炎因子的產(chǎn)生，增加了白介素-10（IL-10）的表達；抑制miRNA-1

8、50組得到了相反的結(jié)果。
　　3、上調(diào)單核細胞中miRNA-150的表達保護AMI后的心肌功能
　　動物實驗顯示在外周細胞高表達miRNA-150的心梗小鼠模型中，相對于對照組小鼠改善了心臟功能，減少了心梗的面積，阻止了心肌細胞的凋亡，并且降低了炎癥單核細胞Ly-6Chigh的聚集；而在移植了miRNA-150敲除鼠骨髓的小鼠心梗模型中，這些保護效應(yīng)則被消除。
　　4、miRNA-150調(diào)控趨化因子受體4（CXCR4）

9、的表達
　　數(shù)據(jù)庫分析得出CXCR4為miRNA-150的靶基因，體外實驗在THP-1細胞中分別轉(zhuǎn)染agomiRNA-150和對照擬合物，WESTERN實驗發(fā)現(xiàn)CXCR4表達相對于對照組下調(diào)；在高表達miRNA-150的小鼠中，分離CD115+單核細胞，同樣發(fā)現(xiàn)CXCR4表達相對于對照組下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1、血漿中降低的miRNA-150可以作為潛在診斷房顫的新指標；
　　2、miRNA-150調(diào)控單核細胞