細(xì)胞質(zhì)Rap1與細(xì)胞核NF-κB p65在胃癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性分析.pdf

1、目的：胃癌是人類消化系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率在我國惡性腫瘤中位居第二位，死亡率位居第三位，嚴(yán)重威脅人類健康。絕大部分患者在確診胃癌時(shí)已處于中晚期，胃癌的診斷治療及預(yù)后目前仍不樂觀，關(guān)于胃癌的基礎(chǔ)與臨床研究顯得非常重要。端粒是位于真核生物染色體末端的DNA-蛋白結(jié)構(gòu)，由大量的端粒結(jié)合蛋白和許多 TTAGGG重復(fù)序列組成。端粒結(jié)合蛋白TRF1(telomeric-repeat binding factor-1)、TRF2(telome

2、ric-repeat binding factor-2)、POT1(protection of telomeres1)、TPP1（adrenocortical dysplasia protein homolog isoform1)、TIN2(TRF1-interacting nuclear protein2)和Rap1（repressor activator protein1）六個(gè)蛋白組成Shelterin復(fù)合體[2]。已經(jīng)證明端粒防止

3、染色體末端發(fā)生融合、降解、丟失和重排等[3]，在細(xì)胞發(fā)生分裂時(shí)，端粒長度會(huì)逐漸縮短，當(dāng)端粒長度縮短到一定程度時(shí)，染色體無法繼續(xù)進(jìn)行半保留復(fù)制，細(xì)胞開始出現(xiàn)衰老死亡[4]。端粒結(jié)合蛋白參與維持端粒結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定，與細(xì)胞衰老和癌變密切相關(guān)[5]。最近研究發(fā)現(xiàn)端粒結(jié)合蛋白除了在端粒發(fā)揮作用外，也具有端粒外功能[6-11]。Rap1與TRF2在端粒組成復(fù)合體，敲除TRF2會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞核Rap1明顯減少，人類細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中也存在一定數(shù)量 Rap1

4、,這部分 Rap1不與 TRF2結(jié)合且不受 TRF2表達(dá)水平的影響[12]。細(xì)胞質(zhì)Rap1通過結(jié)合端粒外TTAGGG位點(diǎn)調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄[6]。另外Teo等發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)Rap1蛋白與IκB激酶(IκB kinases，IKKs)相互作用，磷酸化NF-κB的p65亞基，激活NF-κB信號(hào)通路。在乳腺癌組織中細(xì)胞質(zhì)Rap1表達(dá)增加，抑制Rap1會(huì)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞凋亡[8]，但細(xì)胞質(zhì)Rap1在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用仍不清楚。本研究采用免疫組化技術(shù)檢測

5、細(xì)胞質(zhì) Rap1、細(xì)胞核NF-κB p65在胃癌組織、癌旁組織以及正常胃粘膜組織中的表達(dá)及相關(guān)性,探討其在胃癌的發(fā)生發(fā)展中可能的作用及臨床意義。
　　方法：選取2013年4月至2015年7月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院經(jīng)手術(shù)切除胃癌、癌旁(距離腫瘤組織邊緣小于3 cm以內(nèi))及正常胃粘膜組織（距離腫瘤組織邊緣大于3cm）各90例，且術(shù)前均未接受放、化療及免疫治療。其中男47例,女43例；年齡32～80歲，>50歲的48例，≤50歲的42例

6、,中位年齡50.3歲。TNM分期: TNMⅠ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期55例；病理分型均為腺癌：高分化腺癌30例，中分化腺癌28例，低分化腺癌32例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者38例，伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者52例。浸潤深度：未超過漿膜層者28例，超過漿膜層者62例。全部患者均知情同意且所有標(biāo)本均通過了鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。使用40 g/L甲醛固定所需標(biāo)本,將固定好的標(biāo)本包埋在石蠟中，然后經(jīng)過切片機(jī)切成厚約4μm切片,脫蠟水化,最后

7、高溫高壓修復(fù),采用免疫組織化學(xué)染色法 SP,嚴(yán)格按照試劑盒說明書的具體步驟進(jìn)行操作。以已知的陽性胃癌組織標(biāo)本切片作為陽性對(duì)照,以 PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異比較，采用Spearman檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)分析，P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：⑴Rap1蛋白為細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核著色,以細(xì)胞質(zhì)著色判斷為陽性，陽性染色呈深棕色。Rap1蛋白在正常胃粘膜組織主

8、要為細(xì)胞核染色，細(xì)胞質(zhì)染色較弱,細(xì)胞質(zhì)Rap1在胃癌組織中表達(dá)增加。細(xì)胞質(zhì)Rap1蛋白在正常胃組織、癌旁組織及胃腺癌組織中的陽性表達(dá)率逐漸升高，分別是22.2％、37.8%、75.6%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。⑵NF－κBp65蛋白為細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核著色，以細(xì)胞核著色判斷為陽性，陽性染色呈深棕色。細(xì)胞核NF－κBp65蛋白在正常胃粘膜組織、癌旁組織及胃腺癌組織中的陽性表達(dá)率也是逐漸升高，分別是24.5%、46.7%、70.0%

9、，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。⑶Rap1蛋白在胃腺癌組織中的表達(dá)與癌組織的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度及 TNM分期相關(guān)(P<0.05),與患者性別、年齡無關(guān)(P>0.05)。NF-κBp65蛋白在胃腺癌組織中的表達(dá)與癌組織的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度及TNM分期相關(guān)(P<0.05)，與患者性別、年齡無關(guān)(P>0.05)。⑷細(xì)胞質(zhì)Rap1蛋白與細(xì)胞核NF－κBp65蛋白在胃腺癌中表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.241，P＜0.05）

10、。
　　結(jié)論：①細(xì)胞質(zhì)Rap1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)高于其在癌旁組織、正常胃粘膜組織中的表達(dá)。Rap1蛋白在胃腺癌組織中的表達(dá)與癌組織的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度及TNM分期相關(guān)。提示細(xì)胞質(zhì)Rap1蛋白可能參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。②細(xì)胞核NF－κBp65蛋白在胃癌組織中的表達(dá)高于其在癌旁組織、正常胃粘膜組織中的表達(dá)。NF－κBp65蛋白在胃腺癌組織中的表達(dá)與癌組織的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度及TNM分期相關(guān)。提示NF－κBp6