NF-κB(P65)在小兒局灶性皮質(zhì)發(fā)育不良(FCD)Ⅲa中的表達(dá)分析.pdf

1、研究背景:小兒癲癇是一種神經(jīng)系統(tǒng)綜合征，它的病因及發(fā)作形式復(fù)雜，臨床上以反復(fù)發(fā)作、刻板發(fā)作為特點(diǎn)，居兒童期腦部慢性疾病的第一位，是一種致殘性的疾病。它主要因?yàn)榇竽X神經(jīng)元被多種原因誘導(dǎo)致異常同步放電，進(jìn)一步導(dǎo)致了中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。小兒癲癇嚴(yán)重影響患兒的身心健康，亦給家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。癲癇中約30％為藥物難治性癲癇(refractory epilepsy，RE)，現(xiàn)有藥物難以控制癲癇發(fā)作，需要手術(shù)治療切除致癇灶。在手術(shù)治療的難

2、治性癲癇患兒中，約有75％為局灶性皮質(zhì)發(fā)育不良(focal cortical dysplasia，F(xiàn)CD)。FCD是大腦皮質(zhì)發(fā)育不良的亞型之一，其被認(rèn)為是在胚胎發(fā)育早期神經(jīng)元的正常程序（如增殖遷移分化等）受到干擾所致，其典型的病理改變是皮質(zhì)分層異常和/或出現(xiàn)異形、異位神經(jīng)元。FCD是小兒難治性癲癇中最常見(jiàn)的病理類(lèi)型，根據(jù)其病理目前可分為單純型（包括FCDⅠ型、FCDⅡ型）和結(jié)合型(FCDⅢ)，每一分型又分為不同的亞型，其中FCDⅢ分為F

3、CDⅢa型、FCDⅢb型、FCDⅢc型、FCDⅢd。
　　核因子kappaB(NF-κB)是一種核蛋白因子，是細(xì)胞關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子之一，它可以與免疫球蛋白κB序列（位于k輕鏈基因增強(qiáng)子）特異結(jié)合，具有廣泛的生物學(xué)活性，是多種細(xì)胞因子的上游調(diào)控因子。其中在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮作用的主要是P65/P50異源二聚體，其活性受IKBa和IKBB調(diào)控。NF-κB可被多種細(xì)胞外刺激信號(hào)激活，其DNA構(gòu)象變化被誘發(fā)，使靶基因的轉(zhuǎn)錄被啟動(dòng)或增強(qiáng)，從而調(diào)

4、節(jié)細(xì)胞因子、黏附因子、炎癥反應(yīng)有關(guān)的酶和趨化因子等與炎癥有關(guān)的多種基因的轉(zhuǎn)錄。大量研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB參與了癲癇發(fā)病中的急性炎癥過(guò)程。研究證明，NF-κB除了參與調(diào)節(jié)TNF等細(xì)胞因子的表達(dá)，還與IL-8等趨化因子表達(dá)關(guān)系密切，因此，在炎癥反應(yīng)中，NF-κB通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、趨化因子等表達(dá)發(fā)揮作用。另研究表明NF-KB與神經(jīng)元可塑性密切相關(guān)，NF-κB通過(guò)海馬突觸傳遞長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(Long termpotentiation，LTP)調(diào)節(jié)神經(jīng)

5、元突觸結(jié)構(gòu)和功能變化。很多的實(shí)驗(yàn)研究提示NF-κB核移位與癲癇的產(chǎn)生、發(fā)展與維持有密切的關(guān)系。
　　目的:
　　1 FCDⅢa是小兒難治性癲癇中常見(jiàn)的一種類(lèi)型，其發(fā)病機(jī)制尚未清楚;
　　2目前研究發(fā)現(xiàn)NF-κB與癲癇形成有關(guān)，其機(jī)制可能通過(guò)介導(dǎo)炎癥反應(yīng)實(shí)現(xiàn)，F(xiàn)CDⅢa作為難治性癲癇常見(jiàn)的病理類(lèi)型，NF-κB在FCDⅢa中是否表達(dá)及是否參與其病理過(guò)程，還未見(jiàn)報(bào)道;
　　3研究NF-κB(P65)在小兒難治性癲癇FC

6、DⅢa型中的表達(dá)情況;
　　4探索NF-κB(P65)在FCDⅢa發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:選取2011年10月至2013年4月期間河北省人民醫(yī)院功能神經(jīng)外科行手術(shù)治療的難治性癲癇患兒，篩選出26例FCDⅢa型難治性癲癇患兒臨床手術(shù)切除的皮層致癇灶標(biāo)本作為本研究的實(shí)驗(yàn)組，選取5例病理科尸檢的正常皮層標(biāo)本作為對(duì)照組，利用免疫組織化學(xué)染色、WesternBlot等方法檢測(cè)NF-κB(P65)在FCDⅢa型難治性癲癇患兒腦組織

7、中的表達(dá)，并與正常腦組織的表達(dá)情況進(jìn)行比較。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)均以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組26例中，男16例、女10例，年齡2.5～14.0歲，平均年齡(8.81±2.98)歲;發(fā)病年齡0.5～7.0歲，平均發(fā)病年齡(4.31±1.84)歲;病程2～7年，平均病程(4.67±1.22)年。對(duì)照組5例，男3例、女2例，年齡4

8、.0～12歲，平均年齡(7.80±1.23)歲。免疫組化結(jié)果:FCDⅢa患兒組，NF-κB(P65)高表達(dá)，平均每個(gè)視野NF-κB(P65)免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞為(28.95±5.103)個(gè);對(duì)照組中，NF-κB(P65)呈低表達(dá)，免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為(7.20±2.280)個(gè);兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.186，P＜0.05); WesternBlot檢測(cè)NF-κB(P65)蛋白水平結(jié)果:NF-κB(P65)蛋白在FCDⅢa患兒皮層中高