基于UPLC-MS技術(shù)的針刺合募配穴治療功能性消化不良的代謝組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　采用基于超高效液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿軌道阱質(zhì)譜（UPLC–Q-Exactive Orbitrap-MS）的技術(shù)和方法研究針刺合募配穴對(duì)功能性消化不良(Functional Dyspepsia,FD)患者血漿中內(nèi)源性小分子(分子量﹤1000)代謝物的影響，探討針刺合募配穴對(duì)效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)含量變化的影響及其規(guī)律，為揭示針刺合募配穴治療FD的代謝組學(xué)機(jī)制提供新的生物信息學(xué)依據(jù)和線索。
　　方法：
　　1.FD患者的血漿

2、代謝組學(xué)研究：采用UPLC–Q-Exactive Orbitrap-MS代謝組學(xué)技術(shù)，通過(guò)與健康組比較，找出FD的血漿潛在生物標(biāo)志物，利用MetPA平臺(tái)分析潛在生物標(biāo)志物的代謝途徑。
　　2.合募配穴治療FD的代謝組學(xué)研究：分別采用針刺合募配穴、下合穴、募穴治療FD，運(yùn)用UPLC–Q-Exactive Orbitrap-MS代謝組學(xué)技術(shù)，通過(guò)與各組治療前比較，找出各組FD患者在針刺治療2個(gè)療程（10天）、4個(gè)療程（20天）后血漿中

3、差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的生物標(biāo)志物。
　　3.各組血漿中差異標(biāo)志物的含量變化分析：以健康組的血漿標(biāo)志物的均值含量為參考標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)針刺合募配穴、下合穴、募穴治療FD的治療前、治療2個(gè)療程、治療4個(gè)療程后血漿中的差異標(biāo)志物的均值含量做整體比較，觀察各標(biāo)志物在各組中的均值含量變化趨勢(shì)及變化規(guī)律，探討針刺合募配穴對(duì)FD患者血漿代謝物的影響。
　　結(jié)果：
　　1.與健康組相比，F(xiàn)D患者血漿中苯乙胺、(3R,7R)-1,3,7-Octa

4、netriol含量明顯下降(P<0.01)；亞硝酸鹽、2-苯乙酰胺、L-別異亮氨酸含量明顯升高(P<0.01)；2-己基甘油、4-羥基-L-谷氨酸含量明顯下降(P<0.05)；1-二氫吡咯－2－羧酸酸、D-脯氨酸含量明顯升高(P<0.05)，是FD的潛在生物標(biāo)志物。與FD疾病相關(guān)的代謝通路是苯丙氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝。
　　2.從針刺合募配穴（足三里、中脘）治療FD患者2個(gè)療程和4個(gè)療程后的血漿中，共篩選出15個(gè)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差

5、異的標(biāo)志物（P<0.05），并成功鑒定10個(gè)，其中亞硝酸鹽、2-苯乙酰胺、D-脯氨酸、L-別異亮氨酸在針刺合募配穴治療后的血漿中均呈下調(diào)趨勢(shì)；2-己基甘油、氨基丙二酸、1-吡咯啉-2-羧酸、4-羥基-L-谷氨酸、3-甲基組氨酸、12酮脫氧膽酸在針刺合募配穴治療后的血漿中均呈上調(diào)趨勢(shì)。針刺合募配穴治療FD的相關(guān)調(diào)節(jié)通路是苯丙氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝。
　　3.從針刺下合穴（足三里）治療FD患者2個(gè)療程和4個(gè)療程后的血漿中，共篩選

6、出11個(gè)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的生物標(biāo)志物（P<0.05），并成功鑒定9個(gè)，其中亞硝酸鹽、2-苯乙酰胺、D-脯氨酸、(3R,7R)-1,3,7-Octanetriol、L-異亮氨酸在針刺足三里穴治療后的血漿中均呈下調(diào)趨勢(shì)；2-己基甘油、4-羥基-L-谷氨酸、12酮脫氧膽酸、煙酰胺在針刺足三里穴治療后的血漿中均呈上調(diào)趨勢(shì)。針刺下合穴治療FD的相關(guān)調(diào)節(jié)通路是苯丙氨酸代謝。
　　4.從針刺募穴（中脘）治療FD患者2個(gè)療程和4個(gè)療程后的血漿中，共

7、篩選出11個(gè)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的標(biāo)志物（P<0.05），并成功鑒定10個(gè)，其中亞硝酸鹽、2-苯乙酰胺、D-脯氨酸在針刺中脘穴治療后的血漿中均呈下調(diào)趨勢(shì)；2-己基甘油、氨基丙二酸、1-吡咯啉-2-羧酸、4-羥基-L-谷氨酸、3-甲基組氨酸、12酮脫氧膽酸、L-別蘇氨酸在針刺中脘穴治療后的血漿中均呈上調(diào)趨勢(shì)。針刺募穴治療FD的相關(guān)調(diào)節(jié)通路是苯丙氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝。
　　結(jié)論：
　　1.一系列代謝物的含量變化異常是FD患者血

8、漿代謝物的共同特點(diǎn)，其中，血漿苯乙胺、亞硝酸鹽、2-苯乙酰胺、2-己基甘油、4-羥基-L-谷氨酸、1-吡咯啉-2-羧酸、D-脯氨酸、(3R,7R)-1,3,7-Octanetriol、L-別異亮氨酸，是FD潛在的生物標(biāo)志物。
　　2.與FD疾病相關(guān)的潛在靶標(biāo)通路可能是苯丙氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝。
　　3.針刺合募配穴治療FD的代謝組學(xué)機(jī)制可能與調(diào)控苯丙氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝有關(guān)。
　　4.針刺合募配穴、下合