針刺足三里穴治療功能性消化不良大鼠實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、功能性消化不良(functional dyspepsia，F(xiàn)D)是臨床最常見的一種功能性胃腸病，是指具有上腹痛、上腹脹、早飽、噯氣、食欲不振、惡心、嘔吐等不適癥狀，經(jīng)檢查排除引起上述癥狀的器質(zhì)性疾病的一組臨床綜合征，與中醫(yī)的脾氣虛證類似。癥狀可持續(xù)或反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，降低工作效率，增加了醫(yī)療資源的消耗。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)D患者存在胃腸道的動(dòng)力異常及內(nèi)臟高敏癥，但該病的確切發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚。針刺作為中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的一部分，在我

2、國應(yīng)用已有千余年的歷史。足三里穴定位為犢鼻下3寸，脛骨前嵴外1橫指處。中西醫(yī)結(jié)合臨床實(shí)踐中，發(fā)現(xiàn)針刺足陽明胃經(jīng)在功能性胃腸疾病方面具有自己獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，尤其是針刺足三里穴應(yīng)用較為廣泛。很多研究均顯示，針刺足三里穴可以有效緩解功能性胃腸病，對(duì)其確切作用機(jī)制，目前亦不完全清楚。
　　目的:通過水浸法建立FD大鼠模型，觀察大鼠日均攝食量、體重、腸道敏感性、小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞、血清免疫指標(biāo)的變化，通過表達(dá)譜基因芯片檢測(cè)差異基因、差異基因

3、的分子功能、差異基因參與的信號(hào)通路，進(jìn)一步研究FD的發(fā)病機(jī)制。對(duì)FD大鼠進(jìn)行針刺足三里穴治療，觀察大鼠日均攝食量、體重、腸道敏感性、小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞、血清免疫指標(biāo)的變化，通過表達(dá)譜基因芯片檢測(cè)差異基因、差異基因的分子功能、差異基因參與的信號(hào)通路，探討針刺足三里穴治療FD疾病的機(jī)制。
　　方法:成年Wistar大鼠被分成對(duì)照(control)組、模型(model)組、針刺足三里穴(acupuncture，AP)組、非經(jīng)非穴針刺

4、(sham acupuncture，sham-AP)組。除了control組，將其它組的大鼠通過水浸法建立FD模型。建立FD模型后，監(jiān)測(cè)control組與model組大鼠攝食量、體重，評(píng)估大鼠腸道敏感性。通過結(jié)直腸擴(kuò)張(colorectal distention，CRD)來誘發(fā)急性內(nèi)臟痛，用大鼠對(duì)急性內(nèi)臟痛的腹部回撤反射(abdominal withdrawal reflex，AWR)來評(píng)價(jià)腸道敏感性。取大鼠小腸組織，進(jìn)行免疫熒光染色，

5、共聚焦顯微鏡檢測(cè)深肌層Cajal間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量。檢測(cè)血清IgG、IgM、IL-2和IL-6水平。然后組間結(jié)果進(jìn)行比較。取大鼠小腸組織，進(jìn)行基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)，篩選model組與control組的差異基因，查找其分子功能，篩選差異基因相關(guān)信號(hào)通路。建立FD模型后，AP組大鼠針刺足三里穴15天，每天一次，每次時(shí)間為20分鐘。Sham-AP組大鼠于非經(jīng)非穴點(diǎn)針刺15天，對(duì)model組大鼠進(jìn)行束縛但不予針刺。對(duì)control組大鼠自然飼養(yǎng)。

6、監(jiān)測(cè)大鼠攝食量、體重，評(píng)估大鼠腸道敏感性。取大鼠小腸組織，進(jìn)行免疫熒光染色，共聚焦顯微鏡檢測(cè)深肌層Cajal間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量。檢測(cè)血清IgG、IgM、IL-2和IL-6水平。然后將control組、model組、AP組和sham-AP組間數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。取大鼠小腸組織，進(jìn)行基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)，篩選AP組與model組的差異基因，查找其分子功能，篩選差異基因相關(guān)信號(hào)通路。
　　結(jié)果:1.Model組大鼠的日均攝食量明顯低于contr

7、ol組（T=-5.360 P＜0.01）;體重明顯低于control組（T=-3.144 P＜0.05）;腸道敏感性明顯高于control組。在model組，當(dāng)CRD的壓力為20、40、60或80mmHg時(shí)，AWR評(píng)分均顯著高于control組(T=5.00,P＜0.01; T=2.71,P＜0.05; T=2.71,P＜0.05; T=3.16,P＜0.05)。再經(jīng)過針刺足三里穴15天后，AP組（針刺組）大鼠的日均攝食量明顯高于mod

8、el組（非針刺組）(P＜0.05);體重明顯高于model組(P＜0.05);當(dāng)CRD的壓力為20 mmHg時(shí)，AP組大鼠的腸道高敏癥較model組無明顯差異(P＞0.05)。當(dāng)CRD的壓力為40、60或80mmHg時(shí)，AP組大鼠的腸道高敏癥較model組減輕(P＜0.05, P＜0.05, P＜0.05)。
　　2.Model組大鼠的小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)明顯不正常且數(shù)量低于control組。Cajal間質(zhì)細(xì)胞的免疫熒光值顯

9、著低于control組（T=-21.45，P＜0.01）。再經(jīng)過針刺足三里穴15天后，AP組大鼠的小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)恢復(fù)且數(shù)量明顯高于model組。Cajal間質(zhì)細(xì)胞的免疫熒光值顯著高于model組(P＜0.05)。
　　3.Model組大鼠的血清IgG、IgM和IL-2水平明顯低于control組(T=-11.67，P＜0.01;T=-11.26，P＜0.01;T=-4.44，P＜0.01)，血清IL-6水平明顯高于co

10、ntrol組(T=5.23，P＜0.01)。再經(jīng)過針刺足三里穴15天后，AP組大鼠的血清IgG、IgM和IL-2水平明顯高于model組(P＜0.05;P＜0.05;P＜0.05)，血清IL-6水平明顯低于model組(P＜0.05)。
　　4.小腸組織基因表達(dá)譜芯片檢測(cè):排除無Gene ID的基因，以差異倍數(shù)(foldchange, FC)＞2或＜0.5, P＞0.01為標(biāo)準(zhǔn)，model組大鼠和control組相比，篩選差異基因

11、，有255個(gè)差異基因，其中上調(diào)基因11個(gè)，下調(diào)基因244個(gè)。上調(diào)最顯著的10個(gè)基因是RGD1559622、 Tsks、 Gramd2、 Colq、 Kcnq4、Mecom、Tulp1、Thrb、Acot1、Lss，下調(diào)最顯著的10基因是LOC100362150、Mcpt2、Igh-6、Mcpt114、Cpa3、Mcpt812、Fcer1a、LOC363827、Gpr174、LOC100363695。篩選出差異基因可能相關(guān)的信號(hào)通路19條

12、。共15條信號(hào)通路明顯與免疫反應(yīng)相關(guān)，其中3條信號(hào)通路與肥大細(xì)胞反應(yīng)相關(guān);共5條信號(hào)通路與細(xì)胞增殖、分化、凋亡相關(guān);共2條信號(hào)通路與細(xì)胞內(nèi)活動(dòng)、細(xì)胞內(nèi)代謝、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)有關(guān)。
　　AP組大鼠和model組相比，篩選差異基因，有169個(gè)差異基因，其中上調(diào)基因96個(gè)，下調(diào)基因73個(gè)。共8條信號(hào)通路與脂類代謝有關(guān);共7條信號(hào)通路與碳水化合物、多糖代謝有關(guān);共3條信號(hào)通路與激素、酶等代謝有關(guān);共2條信號(hào)通路與細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)、分解代謝，細(xì)胞膜活動(dòng)等

13、相關(guān);1條信號(hào)通路與細(xì)胞增殖、分化等活動(dòng)相關(guān)。
　　結(jié)論:針刺足三里穴能夠提高FD大鼠攝食量和體重，改善FD大鼠腸道高敏癥，是治療FD的理想治療方式;在FD大鼠，小腸Cajal間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)異常且數(shù)量明顯降低，這可能是FD大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能障礙的原因。在FD大鼠，存在免疫功能低下及免疫功能失調(diào)，這可能是FD內(nèi)臟高敏癥的原因;針刺足三里穴顯示出對(duì)FD較好的治療效果，提示治療的機(jī)制可能與針刺足三里穴能夠改善FD大鼠胃腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞