雷帕霉素聯(lián)合抗CD34抗體復(fù)合支架置入后對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能早期影響的研究.pdf

1、前言:
　　 藥物洗脫支架(Drug eluting stent，DES)通過(guò)程序性的釋放抗增殖藥物有效的抑制了支架置入后平滑肌細(xì)胞的過(guò)度增殖，顯著降低了BMS置入后的支架內(nèi)再狹窄率。然而，由于抗增殖藥物的毒性作用，DES在抑制內(nèi)膜增生的同時(shí)，也造成了血管“內(nèi)皮化延遲”(delayed endothelialization)現(xiàn)象及內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，進(jìn)而導(dǎo)致支架內(nèi)晚期血栓（late stent thrombosis，LST）形成等

2、致命的并發(fā)癥。
　　 近年來(lái)，為了克服支架置入后造成的血管內(nèi)再狹窄缺點(diǎn)，很多新型支架被研制并逐步應(yīng)用于臨床，包括無(wú)聚合物的藥物支架，生物可降解支架，抗體捕獲支架等。其中藥物聯(lián)合抗體技術(shù)復(fù)合支架被認(rèn)為是一個(gè)有效可行的新方向:在藥物洗脫支架抑制內(nèi)膜過(guò)度增生的同時(shí)，在支架上涂覆抗體（CD34，CD133，或者是VEGFR-2等），利用抗原抗體結(jié)合反應(yīng)原理，迅速吸附與捕獲外周血中的內(nèi)皮前體細(xì)胞，造血干細(xì)胞等到損傷血管局部位快速修復(fù)血管內(nèi)

3、皮，克服“內(nèi)皮化延遲”的難題。Granada等人的研究表明，藥物聯(lián)合生物捕獲技術(shù)復(fù)合支架可以在有效預(yù)防支架內(nèi)再狹窄。
　　 我們課題組將抗CD34抗體支架與藥物洗脫支架相結(jié)合(國(guó)家自然基金項(xiàng)目30770631)，研制出雷帕霉素聯(lián)合抗CD34抗體復(fù)合支架，實(shí)現(xiàn)了在抑制平滑肌細(xì)胞過(guò)度增生的基礎(chǔ)上，快速實(shí)現(xiàn)內(nèi)皮化的目標(biāo)，并在臨床前的動(dòng)物試驗(yàn)中取得了滿意的效。但是，這種新型支架對(duì)是否造成了內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙尚不明確，本研究利用掃描電鏡，免

4、疫組化和Western Blot等技術(shù)評(píng)價(jià)新型支架對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的早期影響。
　　 材料與方法:
　　 在12只小型巴馬豬（共12條冠狀動(dòng)脈），隨機(jī)分為兩組SES-CD34+組與BMS組，采用國(guó)際上公認(rèn)的小型豬冠狀動(dòng)脈過(guò)度擴(kuò)張的再狹窄模型，分別置入雷帕霉素CD34抗體復(fù)合支架（SES-CD34+）6枚，金屬裸支架(BMS)6枚。在14天時(shí)處死全部動(dòng)物，取支架段血管標(biāo)本，制作電鏡標(biāo)本，以掃描電鏡觀察支架段血管內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)

5、，利用圖形處理軟件計(jì)算支架置入段血管再內(nèi)皮化程度。小心移除血管段支架，以免疫組化對(duì)eNOS進(jìn)行定位分析，以Western Blot來(lái)測(cè)定支架段血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS的表達(dá)程度，進(jìn)行半定量分析，評(píng)估內(nèi)皮細(xì)胞功能。
　　 結(jié)果:
　　 1結(jié)構(gòu)完整性:支架置入后14天，電鏡結(jié)果顯示在SES-CD34+組與BMS組均已基本完成內(nèi)皮化(92±3％比86±8％，P＞0.05)，但是SES-CD34+組內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，連接不緊密。<