五層龍?zhí)崛∥锔纳聘吖撬麓笫笾靖蔚闹匾肿影悬c(diǎn)——肝臟固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c.pdf

1、目的:五層龍?zhí)崛∥?SOR)為治療肥胖和糖尿病的傳統(tǒng)中草藥，這兩種疾病都與脂肪肝密切相關(guān)。已有研究證實(shí)SOR具有改善脂肪肝的作用，但是其機(jī)制尚不清楚。本文旨在研究SOR改善高果糖所致大鼠脂肪肝的分子機(jī)制。
　　方法:選取24只健康SD大鼠隨機(jī)分為4組(n=6)，飼養(yǎng)10周:(1)空白對(duì)照組:自由飲水;(2)果糖對(duì)照組:給予10％果糖水(w/v，每天配制);(3) SOR低濃度藥物組:果糖溶液+SOR提取物5mg/kg;(4) SO

2、R高濃度藥物組:果糖溶液+SOR提取物20mg/kg。每三天記一次體重，并根據(jù)體重變化調(diào)整用藥組大鼠給藥量。用藥組起始果糖水濃度均為10％，每天記錄攝食量與飲用果糖水量，并計(jì)算果糖攝入量，根據(jù)果糖對(duì)照組近三天果糖攝入量，調(diào)整果糖水濃度使用藥組大鼠果糖攝入量與果糖對(duì)照組一致。于第10周末，夜間禁食14h后，稱重，乙醚麻醉下，摘除眼球取血，分離血漿檢測(cè)TC、TG、血糖、NEFA及胰島素含量;處死大鼠，取肝臟稱重，行肝臟H.E染色和油紅O染色

3、，同時(shí)檢測(cè)肝臟TG、TC含量;用TRIzol提取肝組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，用Real-Time PCR方法檢測(cè)肝臟脂質(zhì)合成轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1c、ChREBP及其下游相關(guān)基因FAS、ACC-1、SCD-1、LPK和脂質(zhì)氧化相關(guān)基因PPAR-α、CPT-1α、ACO及PPAR-γ、 CD36的mRNA水平;提取肝細(xì)胞核蛋白，用Western blot方法檢測(cè)調(diào)節(jié)脂質(zhì)合成的兩個(gè)關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1c和ChREBP的蛋白表達(dá)

4、量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用StatView統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤((x)±SEM)表示，t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組數(shù)據(jù)的差異比較。
　　結(jié)果:
　　1.生化指標(biāo):與空白對(duì)照組相比，果糖對(duì)照組的血漿TC、TG、血糖及胰島素含量明顯增加，而NEFA顯著下降(P＜0.05);SOR用藥組相對(duì)于果糖對(duì)照組，血漿TC、TG、血糖、胰島素及NEFA均無(wú)明顯改變(P＞0.05)。
　　2.肝相關(guān)參數(shù):各組大鼠肝重與肝TC含量無(wú)差異（P＞0.05

5、）;但果糖對(duì)照組與空白對(duì)照組相比，肝重與體重比、肝TG含量明顯升高(P＜0.05); SOR（20mg/kg）顯著下調(diào)果糖引起的肝TG含量的升高(P＜0.05)。
　　3.形態(tài)學(xué)顯示:(1)H.E染色顯示，果糖對(duì)照組肝細(xì)胞空泡化的程度較空白對(duì)照組明顯增強(qiáng)，SOR(20mg/kg)明顯改善肝細(xì)胞空泡化的程度。(2) ORO染色顯示，與空白對(duì)照組比較，果糖對(duì)照組ORO染色陽(yáng)性面積區(qū)域及陽(yáng)性面積率明顯增加(P＜0.05)，SOR(20m

6、g/kg)具有明顯的改善作用(P＜0.05)。
　　4.Real-Time PCR結(jié)果:果糖對(duì)照組相對(duì)于空白對(duì)照組，顯著上調(diào)肝臟SREBP-1c、FAS、ACC-1、SCD-1、ChREBP及LPK mRNA的表達(dá)并下調(diào)ACO與CPT-1α mRNA的表達(dá)(P＜0.05)，對(duì)PPAR-γ、PPAR-α、及CD36mRNA無(wú)顯著性影響（P＞0.05）;SOR（20mg/kg）明顯抑制肝臟SREBP-1c、FAS、ACC-1、SCD-

7、1及ChREBP mRNA的過表達(dá)(P＜0.05)，但對(duì)LPK、PPAR-γ、PPAR-α、ACO、CPT-1α及CD36mRNA無(wú)明顯改變（P＞0.05）。
　　5.Western blot分析顯示:與空白對(duì)照組比較，果糖對(duì)照組細(xì)胞核SREBP-1c和ChREBP的蛋白含量增加（P＜0.05），SOR(20mg/kg)明顯抑制SREBP-1c核蛋白的表達(dá)(P＜0.05)，但沒有顯著改變ChREBP核蛋白含量(P＞0.05)。