XBP-1活性對小鼠移植皮膚存活率的作用研究.pdf

1、目的：X-盒結(jié)合蛋白1(XBP-1)是適應(yīng)性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)進(jìn)程中非折疊蛋白反應(yīng)中的一個(gè)關(guān)鍵限速調(diào)控因子，參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)以及細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性等方面的調(diào)控。近期研究發(fā)現(xiàn)，XBP-1活化亞型XBP-1s也參與了炎癥反應(yīng)以及免疫調(diào)節(jié)的諸多環(huán)節(jié)。但其在組織、器官移植免疫耐受領(lǐng)域的作用機(jī)制尚未闡明。本研究通過調(diào)節(jié)小鼠體內(nèi)XBP-1活性，探討其在皮膚移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)中的作用及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：健康6-8周齡BALB/c小鼠及C57B

2、L/6小鼠分別作為供體及受體，根據(jù)MacFarlane推薦的方法建立BALB/c小鼠到C57BL/6小鼠皮膚“背對背”急性排斥反應(yīng)模型。受體隨機(jī)分為3組，分別設(shè)置為轉(zhuǎn)染組(n=15)、對照組(n=15)以及PBS組(n=15)。轉(zhuǎn)染組于手術(shù)日至術(shù)后第7日每日經(jīng)尾靜脈注入100μg XBP-1-小干擾RNA慢病毒質(zhì)粒;對照組于手術(shù)日至術(shù)后第7日每日經(jīng)尾靜脈注入100μg空載體慢病毒質(zhì)粒;PBS組于手術(shù)日至術(shù)后第7日每日經(jīng)尾靜脈注入同等劑量

3、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。術(shù)后10天取受體移植皮膚標(biāo)本及眼球血待檢。每日觀察移植物活性，傷口愈合等情況同時(shí)繪制生存曲線，評(píng)估生存率及急性排斥反應(yīng)發(fā)生比例;HE染色法觀察各組移植皮膚病理改變;每日記錄各組受體體重變化，全自動(dòng)生化分析檢測儀檢測各組肝功能及腎功能情況。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(RT-PCR)檢測移植皮膚內(nèi)XBP-1、IL-6、LFN-γ及IL-10的mRNA相對表達(dá)水平;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清IL-6、LF

4、N-γ及IL-10含量。
　　結(jié)果：①建立穩(wěn)定的BALB/c-C57BL/6小鼠“背對背”皮膚移植急性排斥反應(yīng)模型，手術(shù)失敗率低于5％。②轉(zhuǎn)染組移植皮膚皮片大部分脫痂，5-7天左右長出新毛，未見皮膚皺縮、脫落、色素沉著等表現(xiàn)。③術(shù)后各組受體間體重變化無明顯改變，白細(xì)胞計(jì)數(shù)呈輕度上升趨勢但三組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④各組間ALT及血清肌酐指數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。⑤轉(zhuǎn)染組移植皮膚病理改變較空白載體組及PBS組有明顯的改善，少量上皮壞死以及炎癥

5、細(xì)胞浸潤，呈輕度排斥反應(yīng)，移植物平均生存天數(shù)大于30天，而對照組及PBS則分別為10天和12天（*P＜0.05）;⑥RT-PCR檢測各組XBP-1基因表達(dá)水平分別為0.41±0.07，1.08±0.08，1.11±0.51，轉(zhuǎn)染組XBP-1的表達(dá)較其余兩組受到明顯抑制;各組IFN-γ及IL-6的基因表達(dá)水平分別為0.28±0.012，0.84±0.02，0.79±0.015和0.47±0.019，0.95±0.02，0.98±0.017

6、。轉(zhuǎn)染組IFN-γ及IL-6較其余兩組有明顯下降（*P＜0.05），而IL-10水平分別為4.6±0.21，1.86±0.14，1.57±0.18，轉(zhuǎn)染組IL-10水平較其余兩組顯著增高（*P＜0.05）。⑦ELISA結(jié)果提示各組血清中IL-6、LFN-γ及IL-10含量與RT-PCR結(jié)果趨勢相符合。
　　結(jié)論：抑制小鼠體內(nèi)XBP-1活性可通過調(diào)節(jié)局部細(xì)胞因子表達(dá)，從而延緩皮膚移植后急性排斥反應(yīng)，其具體機(jī)制可能與調(diào)節(jié)抗原呈遞細(xì)胞功