HFHG5基因的功能研究.pdf

1、據(jù)世界衛(wèi)生組織最新統(tǒng)計(jì)，心臟病以12.9％致死率位居疾病的首位。該疾病已成為科學(xué)家們急待解決的世界性難題。已知心臟病的早期癥狀可表現(xiàn)為病理性心肌肥大。因此，從分子學(xué)水平上系統(tǒng)地研究心肌肥大的調(diào)控機(jī)制，將為治愈心臟病提供理論指導(dǎo)。
　　已有研究表明，在小鼠模型（主動(dòng)脈捆扎法）及病人組織樣本中HFHG5的表達(dá)均上調(diào)，這暗示了心肌肥厚的發(fā)生可能與HFHG5相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)熒光素報(bào)告系統(tǒng)分析及CO-IP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HFHG5與Smad3/

2、4存在相互作用，這暗示了HFHG5很可能通過(guò)TGF-β/Smads信號(hào)途徑進(jìn)行調(diào)控心肌肥大的發(fā)生，但其機(jī)制尚未被研究。接下來(lái)的研究就此展開(kāi)。
　　為了研究FHG5基因調(diào)控心肌肥大發(fā)生的機(jī)制，本文開(kāi)展了下述研究:
　　(1)構(gòu)建了重組腺病毒載體pAd-HFHG5并制備了腺病毒，經(jīng)驗(yàn)證腺病毒AdHFHG5構(gòu)建成功。AdHFHG5主要用于新生大鼠原代心肌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)FHG5的實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，成功構(gòu)建了干擾載體pSuper-HFHG5-

3、shRNA及驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)室已有的過(guò)表達(dá)載體pCMV-Myc-h-HFHG5，這一對(duì)載體主要用于體外干擾和過(guò)表達(dá)FHG5的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。
　　(2)利用PE及FBS分別刺激新生大鼠原代心肌細(xì)胞（AdGFP組及AdHFHG5組），檢測(cè)到HFHG5表達(dá)在肥大刺激后均會(huì)發(fā)生上調(diào)，這表明HFHG5與心肌肥大相關(guān)。
　　(3)通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)研究HFHG5與Smad4的定位情況，發(fā)現(xiàn)HFHG5在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有表達(dá)，且在細(xì)胞質(zhì)中與Smad

4、4存在共定位。
　　(4) Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)HFHG5促進(jìn)了Smad4入核，而干擾HFHG5會(huì)抑制Smad4入核，這證明了HFHG5通過(guò)促進(jìn)Smad4的入核，參與TGF-β/Smads信號(hào)途徑的調(diào)控。
　　(5)初步研究了HFHG5與Smad4協(xié)同入核后的下游調(diào)控機(jī)制。RT-PCR實(shí)驗(yàn)證明HFHG5與Smad4協(xié)同入核后可以激活下游肥大相關(guān)基因的表達(dá)，表明HFHG5促進(jìn)心肌肥大發(fā)生的分子機(jī)制主要是HF