探討酵母Tral蛋白突變影響基因表達(dá)的作用機(jī)制.pdf_第1頁
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1、Tra1蛋白是酵母染色質(zhì)重塑復(fù)合物SAGA、NuA4的唯一共有亞基,同時(shí)它也是多種轉(zhuǎn)錄激活子的直接作用目標(biāo),參與了細(xì)胞內(nèi)大量的生理進(jìn)程。Tral蛋白可能通過三種方式影響轉(zhuǎn)錄,包括影響Tra1蛋白直接招募到目的基因啟動(dòng)子,染色質(zhì)重塑復(fù)合物SAGA和NuA4完整性和穩(wěn)定性,影響對(duì)組蛋白修飾。本課題利用實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的Tra1突變菌株Tra1-1、Tra1-2分兩個(gè)方面來探討Tra1突變是如何影響基因表達(dá)的作用機(jī)制。一方面我們利用免疫共沉淀來

2、檢測(cè)Tra1突變是否影響染色質(zhì)重塑復(fù)合物SAGA和NuA4的完整性和穩(wěn)定性。另一方面我們通過比較不同Tra1突變菌種在半致死溫度下穩(wěn)定生長(zhǎng)狀態(tài)下和由寬松生長(zhǎng)溫度下瞬間轉(zhuǎn)移到嚴(yán)謹(jǐn)溫度后30min的芯片結(jié)果來分析哪些基因是包含Tra1復(fù)合物的直接作用的靶基因,哪些是由于級(jí)聯(lián)效應(yīng)引發(fā)的。免疫共沉淀結(jié)果顯示Tra1突變影響了SAGA和NuA4的完整性和穩(wěn)定性,而且Tra1-2影響的程度較Tra1-1更嚴(yán)重。microarray結(jié)果顯示Tra1突

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