APJ拮抗劑Apelin13(F13A)對(duì)大鼠肝纖維化的影響及機(jī)制.pdf

1、【目的】
　　觀測(cè)血管緊張素受體AT1相關(guān)的受體蛋白（APJ）拮抗劑Apelin13(F13A)對(duì)肝纖維化的影響，并探討其可能的機(jī)制。
　　【方法】
　　S-D雄性大鼠隨機(jī)地分為對(duì)照組、肝纖維化模型組和Apelin13(F13A)組。通過(guò)腹腔注射四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型。Apelin13(F13A)按100μg/kg體重通過(guò)腹腔注射給藥8周。采用全自動(dòng)生化分析檢測(cè)儀測(cè)量血清總蛋白（TPROT），白蛋白（

2、ALB）和球蛋白（GLB）水平等反映肝臟蛋白合成代謝功能的指標(biāo)以及血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）水平等反映肝細(xì)胞受損情況的指標(biāo)。采用ELISA法檢測(cè)反映肝臟纖維化的血清學(xué)指標(biāo)，包括血清透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、三型前膠原（PcⅢ）和IV型膠原（IV-C）水平。采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清Apelin-36、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的水平。取肝左葉同一部位，蘇木精-伊

3、紅（HE）染色觀察肝臟的病理形態(tài)學(xué)變化。采用實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot檢測(cè)肝臟中Apelin-36、APJ、TGF-β1、α-SMA及內(nèi)物質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志蛋白葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CHOP）和Tribbles同源蛋白3（TRB3）的蛋白表達(dá)。
　　【結(jié)果】
　?。?）實(shí)驗(yàn)8周結(jié)束后,對(duì)照組的全部大鼠均存活,肝纖維化模型組大鼠死亡5只，Apelin13(F13A)處理

4、組大鼠死亡1只。肝纖維化模型組大鼠毛發(fā)枯黃沒(méi)有光澤，精神狀態(tài)萎靡，活動(dòng)明顯減少，對(duì)外界刺激反應(yīng)不靈敏，體重明顯減輕。對(duì)照組大鼠活動(dòng)自如，沒(méi)有出現(xiàn)上述現(xiàn)象。Apelin13(F13A)處理組大鼠上述的現(xiàn)象明顯減輕，活動(dòng)較好。
　?。?）與對(duì)照組比較，肝纖維化模型組大鼠血清Apelin-36水平及肝臟組織中Apelin-36和APJ mRNA和蛋白的表達(dá)均顯著升高（P﹤0.05）；Apelin13(F13A)處理組大鼠血清Apelin

5、-36水平及肝臟組織中Apelin-36和APJ mRNA和蛋白的表達(dá)與肝纖維化模型組比較沒(méi)有顯著性差異（均P﹥0.05）。
　?。?）與對(duì)照組比較，肝纖維化模型組大鼠血清的TPROT和ALB水平顯著降低（均P﹤0.05），而GLB、ALT和AST水平均顯著增加（均P﹤0.05）；與模型組比較，Apelin13(F13A)組血清TPROT和ALB水平（均P﹤0.05）顯著增加，而血清GLB、ALT和AST水平顯著降低（均P﹤0.0

6、5）。
　?。?）與對(duì)照組比較，肝纖維化模型組大鼠血清的HA、LN、PCⅢ和IV-C水平顯著增加（均P﹤0.05）。與模型組比較，Apelin13(F13A)處理顯著降低了血清HA、LN、PCⅢ和IV-C水平顯著降低（均P﹤0.05）。
　?。?）對(duì)照組大鼠肝臟的肝小葉結(jié)構(gòu)完整、肝索和肝血竇以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝細(xì)胞排列整齊，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的膠原纖維增生，肝臟組織纖維化程度分級(jí)為0級(jí)；肝纖維化模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)破壞

7、嚴(yán)重，肝細(xì)胞排列紊亂，匯管區(qū)發(fā)現(xiàn)明顯的壞死細(xì)胞和炎性細(xì)胞，匯管區(qū)和小葉內(nèi)可見(jiàn)大量膠原纖維增生，膠原纖維向肝實(shí)質(zhì)內(nèi)延伸形成纖維縱隔，肝臟組織纖維化程度分級(jí)為多為3-4級(jí)；與模型組比較，Apelin13(F13A)組大鼠肝臟組織肝細(xì)胞變性和壞死明顯減少，肝纖維化程度明顯減輕，肝臟組織纖維化程度分級(jí)多為1-2級(jí)。
　?。?）與對(duì)照組比較，肝纖維化模型組大鼠血清TGF-β1和α-SMA的水平及肝臟組織中TGF-β1和α-SMA mRNA和

8、蛋白的表達(dá)均顯著增加（均P﹤0.05）。與模型組比較，Apelin13(F13A)組血清TGF-β1和α-SMA的水平及肝臟組織中TGF-β1和α-SMA mRNA和蛋白的表達(dá)均顯著降低（均P﹤0.05）。
　?。?）與對(duì)照組比較，肝纖維化模型組大鼠肝臟組織中GRP78、CHOP和TRB3 mRNA和蛋白的表達(dá)均顯著增加（均P﹤0.05）。與模型組比較，Apelin13(F13A)組大鼠肝臟組織中GRP78、CHOP和T