高血糖對(duì)大鼠肝纖維化的影響及其發(fā)生機(jī)制的研究.pdf

1、目的:肝纖維化是各種原因引起肝內(nèi)結(jié)締組織增生的病理過(guò)程。以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)蛋白合成、降解和沉積不平衡是肝纖維化發(fā)生的主要機(jī)制。參與ECM蛋白分解代謝的重要酶是基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs),其中間質(zhì)膠原酶 MMP-1,可以降解 ECM為主的Ⅰ、Ⅱ型膠原。MMPs特異性受金屬蛋白酶組織抑制劑(tissue inhibitors of

2、 matrix metalloproteinases, TIMPs)的調(diào)控,TIMP-1對(duì)MMP-1有特異性抑制作用,所以 TIMP-1/MMP-1系統(tǒng)平衡在肝纖維化中有重要意義。糖尿病是常見(jiàn)的代謝性疾病,高血糖是糖尿病的重要表現(xiàn)。研究表明,高血糖對(duì)肝臟纖維化有明顯的促進(jìn)作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立糖尿病肝纖維化模型大鼠,探討高血糖加重肝纖維化發(fā)生的可能機(jī)制,為臨床上糖尿病相關(guān)肝纖維化的防治提供實(shí)驗(yàn)思路和新的方向。
　　方法:將60只雄性

3、健康SD大鼠隨機(jī)分為四組:對(duì)照組、糖尿病組、肝纖維化組、糖尿病肝纖維化組(雙模型組)各15只。糖尿病組和雙模型組大鼠腹腔注射35mg/kg鏈尿佐菌素(streptozocin, STZ)檸檬酸鹽緩沖液建立糖尿病模型,48小時(shí)尾靜脈采血檢測(cè)血糖大于16.7mmol/L確定為糖尿病造模成功;一周后肝纖維化組.雙模型組大鼠皮下注射40％CCL4花生油溶液0.4ml/kg,以后每隔3天皮下注射40％CCL4花生油0.2ml/kg,對(duì)照組以同體積

4、的檸檬酸鹽和花生油溶液代替,共8周。在末次注射 CCL43天后,心臟采血收集血清,用自動(dòng)生化檢測(cè)儀檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(ALB)和白蛋白/球蛋白(A/G);用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)肝纖維化指標(biāo)透明質(zhì)酸(HA)、層連蛋白(LN)、Ⅲ型前膠原(PⅢNP)和Ⅳ型膠原(C-Ⅳ);各組大鼠進(jìn)行肝組織蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin, HE)染色并觀察肝細(xì)胞變性壞死和纖維化的程度;Van

5、 Gieson(VG)染色觀察肝組織中膠原增生的程度;免疫組織化學(xué)檢測(cè)PAI-1蛋白表達(dá)的水平;Real-Time PCR檢測(cè)肝臟組織α-SMA、MMP-1和TIMP-1基因的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1.與對(duì)照組和糖尿病組相比,肝纖維化組、雙模型組大鼠血清中ALT、AST明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);和肝纖維化組比較,雙模型組大鼠中ALT、AST升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);和對(duì)照組和糖尿病組相比,肝纖維

6、化組、雙模型組大鼠血清中ALB、A/G下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2.與對(duì)照組和糖尿病組相比,肝纖維化組和雙模型組大鼠血清中HA、LN、PⅢNP、C-Ⅳ濃度明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與肝纖維化組比較,雙模型組大鼠血清中的HA、C-Ⅳ濃度升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.與肝纖維化組比較,雙模型組大鼠的肝臟纖維化積分增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4.與對(duì)照組和糖尿病組相比,肝纖維化

7、、雙模型組大鼠中的PAI-1蛋白表達(dá)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與肝纖維化組比較,雙模型組大鼠中的PAI-1蛋白表達(dá)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5.與對(duì)照組和糖尿病組相比,肝纖維化組、雙模型組中的α-SMA mRNA明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與肝纖維組比較,雙模型組中的α-SMA mRNA升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。6.與對(duì)照組和糖尿病組相比,肝纖維化組、雙模型組中T

8、IMP-1、TIMP-1/MMP-1的基因表達(dá)升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與肝纖維組比較,雙模型組中TIMP-1、TIMP-1/MMP-1的基因表達(dá)升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:1.高血糖促進(jìn)和加重肝纖維化,主要表現(xiàn)為肝功能水平降低和血清纖維化指標(biāo)水平增加及肝臟內(nèi)膠原增生加重。2.高血糖可促進(jìn)肝臟中HSC活化、增殖,促進(jìn)PAI-1表達(dá),引起TIMP-1分泌增多,二者共同抑制MMP-1加重肝纖維