過(guò)氧化物酶增殖體受體-γ在哮喘小鼠氣道重塑中的作用機(jī)制探討.pdf

1、目的:1.建立OVA致敏和激發(fā)的昆明小鼠慢性哮喘氣道重塑模型;2.通過(guò)觀察哮喘組、干預(yù)組及對(duì)照組小鼠肺組織PPAR-γ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的變化，肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和VEGF、IL-13水平的變化及三組小鼠肺組織病理、氣道形態(tài)學(xué)變化，探討PPAR-γ在支氣管哮喘氣道重塑發(fā)病機(jī)制的作用及其早期干預(yù)對(duì)哮喘氣道重塑的影響。
　　 方法:4～6周齡，18～22gSPF級(jí)雌性昆明小鼠30只（由大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），隨機(jī)分為3組:

2、哮喘模型組（哮喘組）、羅格列酮干預(yù)組（干預(yù)組）及對(duì)照組，每組10只。以雞卵清蛋白(OVA)致敏的方法建立哮喘模型:哮喘組及干預(yù)組小鼠于實(shí)驗(yàn)第0、7、14天給予20μgOVA+150μlAL(OH)3+50μlNS(100mg/L)混懸液腹腔注射致敏;第27、28、29天，給予50μlOVA-NS(2g/L)滴鼻激發(fā);第30～60天將哮喘組小鼠置于自制霧化箱內(nèi)給予2％OVA生理鹽水霧化液超聲霧化吸入，每天1次，每次持續(xù)30分鐘;干預(yù)組小鼠

3、霧化前1小時(shí)首先給予羅格列酮5mg/Kg灌胃，霧化吸入OVA溶液方法同哮喘組;對(duì)照組以生理鹽水代替致敏液、激發(fā)液及霧化液，方法同哮喘組。在末次霧化24小時(shí)后，三組小鼠頸椎脫位處死、取材，取肺泡灌洗液，離心，上清液采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法測(cè)定VEGF、IL-13水平，沉渣在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù);制備肺組織石蠟切片，分別行HE染色及免疫組化，HE染色肺組織切片在顯微鏡觀察小鼠肺組織病理變化及氣道形態(tài)學(xué)改變

4、:總管壁面積/支氣管基底膜周徑(WAt/Pbm)、平滑肌面積/支氣管基底膜周徑(WAm/Pbm)及氣道平滑肌(ASM)厚度;免疫組化肺組織切片在顯微鏡下分別觀察三組小鼠4個(gè)視野內(nèi)肺泡區(qū)染色陽(yáng)性細(xì)胞（棕黃色）的百分比，計(jì)算PPAR-γ陽(yáng)性數(shù);取出所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5軟件進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.激發(fā)后哮喘組小鼠出現(xiàn)不同程度的煩躁不安、呼吸急促、前肢搔鼻、俯伏不動(dòng)，二便失禁，皮毛失去光澤等癥狀;干預(yù)組

5、小鼠干預(yù)前癥狀同哮喘組小鼠，干預(yù)后此類(lèi)癥狀減輕;而正常組小鼠無(wú)此類(lèi)癥狀。
　　 2.肺組織病理學(xué)觀察:在高倍鏡下觀察，哮喘組小鼠氣管壁增厚，管腔變形、呼吸道可見(jiàn)上皮細(xì)胞脫落、粘液分泌增多、氣道平滑肌增厚、血管管壁增、粘膜下及管壁周?chē)仔约?xì)胞浸潤(rùn)明顯;干預(yù)組可見(jiàn)上皮細(xì)胞偶有脫落，粘膜相對(duì)光滑完整，管壁及血管壁及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)均明顯輕于哮喘組;對(duì)照組小鼠氣管及肺泡結(jié)構(gòu)正常，支氣管粘膜上皮完整，未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞。
　　 3.氣道

6、形態(tài)學(xué)分析:哮喘組、干預(yù)組及對(duì)照組小鼠總管壁面積/支氣管基底膜周徑(WAt/Pbm)分別為15.25±1.43μm2/μm、11.94±1.26μm2/μm、10.79±2.20μm2/μm;平滑肌面積/支氣管基底膜周徑(WAm/Pbm)分別為4.17±0.70μm2/μm、2.88±0.63μm2/μm、4.02±0.77μm2/μm;氣道平滑肌(ASM)厚度分別為15.7±2.0μm、10.7±1.3μm、5.1±1.8μm。哮喘組

7、小鼠WAt/Pbm、WAm/Pbm、ASM厚度均較干預(yù)組及對(duì)照組明顯升高(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;干預(yù)組小鼠WAt/Pbm、WAm/Pbm、ASM厚度均較對(duì)照組明顯升高(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.小鼠BALF中嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù):哮喘組小鼠為12.32±0.91×106/ml，干預(yù)組小鼠為7.13±0.41×106/ml，對(duì)照組小鼠為0.50±0.08×106/ml。哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)水平明顯高于

8、干預(yù)組及對(duì)照組(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;干預(yù)組嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)與對(duì)照組比較(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5.肺泡灌洗液IL-13、VEGF水平:哮喘組、干預(yù)組及對(duì)照組BALF中IL-13水平分別為59.82±16.98pg/ml、40.25±3.87pg/ml、35.05±6.67pg/ml;VEGF水平分別為246.14±15.77pg/ml、32.75±2.45pg/ml、85.40±8.32pg/m

9、l。哮喘組IL-13、VEGF水平明顯高于對(duì)照組及對(duì)照組(P＜0.01);干預(yù)組BALF中IL-13、VEGF水平較哮喘組有所下降，與對(duì)照組比較仍有顯著性差異(P＜(0).01)。
　　 6.免疫組化觀察肺組織PPAR-γ陽(yáng)性計(jì)數(shù):哮喘組為13.05±0.83，干預(yù)組為18.14±0.83，對(duì)照組為7.63±0.74;干預(yù)組PPAR-γ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯高于對(duì)照組、哮喘組(P＜0.01);哮喘組PPAR-γ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)高于對(duì)照組(P＜