過氧化物酶體增殖因子活化受體δ（PPARδ）在大腸癌發(fā)生中的作用研究.pdf

1、第一部分人直腸癌組織中PPARδ的表達及意義--附86例臨床分析 目的：探討PPAR δ基因對大腸癌細胞增殖活力及凋亡機能的影響。 方法：構建4條表達短發(fā)夾結構RNA(short-hairpin RNA，shRNA)的質粒載體，其中3條為靶向PPAR δ基因的候選載體(pS-shRNA-1，-2，-3)，1條為不靶向任何編碼序列的陰性干擾載體(pS-shRNA-N)。將人大腸癌細胞株HCT-116分為4個組：①．干擾組：

2、分別用pS-shRNA-1，-2，-3轉染細胞；②．陰性干擾組：用pS-shRNA-N轉染細胞；③．空白質粒組：用空白pSUPER質粒轉染細胞：④．對照組：HCT-116細胞和其它組在相同條件下培養(yǎng)，但不轉染質粒。用脂質體2000進行轉染，48h后，應用Feal-time RT-PCR分析PPARδ基因表達，篩選出強效表達載體。采用噻唑藍(MTT)比色實驗、流式細胞術及原位缺口末端標記法(TUNEL)觀察PPAR δ基因沉默對大腸癌細胞

3、增生、細胞周期及凋亡的影響。 結果：pS-shRNA-1質粒能顯著抑制HCT-116細胞中PPAR δ的表達，使PPARδ mRNA水平下調73.5％(P=0.012)。MTT試驗顯示，轉染后24-96h，對照組、pS-shRNA-N及空白質粒組的光吸收值在各時點均無顯著性差異(P>0.05)，而pS-shRNA-1干擾組在各時點的光吸收值均顯著高于前三組細胞(P<0.05)。轉染后48h，干擾組的G<,1>期細胞分布比對照組顯

4、著降低(26.8％VS 38.6％，P=0.037)，而對照組、pS-shRNA-N及空白質粒組均無顯著性差異(P>0.05)，各組在S期與G<,2>/M期的細胞分布比例(S期：G<,2>/M期)無顯著差異(P=0.782)。轉染后48h，pS-shRNA-1干擾組、pS-shRNA-N組、空白質粒組及對照組的細胞凋亡指數(shù)分別為3.76±1.81％、3.98±2.0％、4.0±1.64％、4.70±1.93％，各組間無顯著性差異(P=0

5、.726)。 結論：PPAR δ基因可增加G<,1>期的大腸癌細胞分布，并抑制細胞增殖，PPARδ對大腸癌細胞的凋亡無影響。 第二部分 應用RNA干擾技術研究PPARδ基因對大腸癌細胞增生及凋亡的影響 目的：分析人直腸癌組織中PPAR δ基因的表達變化及其與直腸癌臨床病理特征的關系。 方法：選取2004年4-10月四川大學華西醫(yī)院普外科手術切除的直腸癌標本86例，以正常直腸粘膜為對照，采用real-tim

6、e RT-PCR對PPAR δ mRNA作定量檢測，并分析其表達與直腸癌分化程度、病理類型及Dukes分期的關系。 結果：在86例直腸癌組織中，PPAR δ表達上調占55.8％(48/86)，其中，45.3％(39/86)上調1.5-5倍，5.8％(5/86)上調10-20倍，4.7％(4/86)大于20倍，PPAR δ表達下調占44.2％(38/86)，下調1.5-2.0倍。直腸癌組織中PPAR δ的總體表達水平比正常粘膜組平