大麻酚衍生物對中樞性呼吸活動的作用及機制.pdf

1、大麻素包括天然大麻素、內(nèi)源性大麻素和人工合成的大麻素。△9-四氫大麻酚(△9-tetrahydroeannabinol,△9-THC),是從印度大麻提取出來的主要的天然大麻素。在動物體內(nèi)存在著內(nèi)源性的大麻素系統(tǒng),包括內(nèi)源性大麻素配體、受體和內(nèi)源性大麻素合成及分解的酶。人工合成的大麻素包括非選擇性和選擇性的大麻受體激動劑。以往的研究提示大麻素可影響呼吸功能,但這種影響是否涉及呼吸節(jié)律中樞并沒有直接的證據(jù)。有研究表明:包括呼吸節(jié)律中樞在內(nèi)的

2、延髓腹外側(cè)存在著CB1R和CB2R,提示大麻素可能對呼吸節(jié)律中樞具有調(diào)節(jié)作用。1984年Suzue等建立了在離體的大鼠延髓研究呼吸中樞活動的模型。此后這一模型成為了呼吸中樞研究領(lǐng)域的經(jīng)典方法。因此,本工作首先擬在具有自主呼吸節(jié)律的大鼠延髓腦片,研究大麻受體激動劑對中樞性呼吸活動的影響,以及這種影響是否是受體依賴性的。大麻除了通過其受體起作用,還通過非受體依賴機制對眾多離子通道和受體起調(diào)節(jié)作用。新近的研究表明內(nèi)源性大麻素arachidon

3、oylethanolamide(AEA)可能是ATP-敏感鉀通道(KATP)的抑制劑。因此,本工作還擬在離體延髓腦片模型通過觀察KATP的藥理學(xué)干預(yù)(選擇性開放劑diazoxide,選擇性抑制劑glybenclamide)對呼吸中樞活動的作用,比較大麻受體激動劑和glybenclamide對呼吸中樞的作用是否具有類似性,以及觀察diazoxide對呼吸中樞的作用是否可被大麻受體激動劑以非受體依賴方式所拮抗,驗證大麻素在呼吸中樞是否作為K

4、ATP的抑制劑起調(diào)節(jié)作用。
　　 結(jié)果如下:
　　 一.大麻酚衍生物對于中樞性呼吸活動的作用及受體依賴性機制研究
　　 1.為了研究大麻酚衍生物對于中樞性呼吸活動的影響,我們首先觀察了非選擇性大麻受體激動劑WIN55212-2、選擇性CB1R激動劑M1438以及選擇性CB2R激動劑AM1241對于中樞性呼吸活動的作用。結(jié)果表明WIN55212-2、M1438、AM1241顯著抑制中樞性呼吸活動的頻率和面積。這些結(jié)

5、果提示大麻酚衍生物顯著抑制中樞性呼吸活動。
　　 2.為了明確大麻酚衍生物是否通過CB1R起作用,我們研究了CB1R拮抗劑AM251能否拮抗M1438對于中樞性呼吸活動的抑制作用。結(jié)果表明M1438對于中樞性呼吸活動的抑制作用不被AM251所拮抗。這一結(jié)果提示M1438抑制中樞性呼吸活動的作用是CB1R非依賴性的。
　　 3.為了明確大麻酚衍生物是否通過CB2R起作用,我們研究了CB2R拮抗劑AM630能否拮抗AM124

6、1對于中樞性呼吸活動的抑制作用。結(jié)果表明AM1241對于中樞性呼吸活動的抑制作用不被AM630所拮抗。這一結(jié)果提示AM1241對于中樞性呼吸活動的抑制作用是CB2R非依賴性的。
　　 4.為了研究大麻酚衍生物是否通過辣椒素受體1(VR1)起作用,我們研究了辣椒素受體拮抗劑釕紅(ruthenium red)能否拮抗CB2R激動劑AM1241的作用。結(jié)果表明釕紅不能拮抗AM1241的中樞性呼吸活動抑制作用。這一結(jié)果提示大麻酚衍生物對

7、于中樞性呼吸活動的作用亦不依賴于VR1受體。
　　 二.大麻酚衍生物對于中樞性呼吸活動作用的非受體依賴性機制研究
　　 為了明確大麻酚衍生物是否通過KATP起作用,我們研究了KATP抑制劑格列苯脲和其開放劑diazoxide對于中樞性呼吸活動的影響,研究了大麻酚衍生物能否逆轉(zhuǎn)KAxP開放劑diazoxide對于中樞性呼吸活動的作用。結(jié)果表明,短時間(15-20 min)應(yīng)用格列苯脲先興奮后抑制中樞性呼吸活動,這與短時間(

8、5-15 min)應(yīng)用大麻酚衍生物所引起的中樞性呼吸活動變化的作用模式部分類似;長時間(≥1h)應(yīng)用格列苯脲引起中樞性呼吸活動抑制甚至呼吸停止,這與大麻酚衍生物在某些腦片對中樞呼吸活動的作用幾乎完全相同。Diazoxide引起中樞性呼吸活動嚴(yán)重抑制甚至呼吸停止,格列苯脲、CB1受體激動劑M1438、CB2受體激動劑AM1241均可逆轉(zhuǎn)diazoxide的呼吸抑制作用,且大麻受體激動劑的逆轉(zhuǎn)作用不能被同時使用相應(yīng)的拮抗劑所拮抗。這些結(jié)果提