丹紅注射液對腦出血大鼠的腦保護作用及其機制的研究.pdf

1、目的：
　　腦出血（Intracerebral hemorrhage，ICH）是高患病率和死亡率的卒中亞型，但其治療方法卻遠不及缺血性卒中。
　　ICH后血腫占位效應導致初級損傷，血細胞降解產物及繼發(fā)炎癥反應、氧化應激等導致二級損傷，氧化應激誘導炎癥反應，炎癥通過氧化應激損傷腦組織。Peroxiredoxins（Prxs，過氧化物酶）家族是一類重要的抗氧化應激蛋白，其在哺乳動物腦內有六型，均在胞內發(fā)揮抗氧化作用，研究表明Pr

2、xs將胞內的過氧化物減少達90％，其中I型主要位于膠質細胞;Prx1是ICH急性期和亞急性期最主要的出血應激誘導亞型，ICH刺激Prx1表達及胞外釋放后活化TLR4/NF-KB通路，促進TNF-a、IL-6、IL-17的表達，介導炎癥損傷。
　　丹紅注射液(Dan Hong Injection，DHI)由中國的傳統(tǒng)藥材丹參、紅花提煉而得，其主要有效成分是羥基紅花素A、丹參酚酸B、丹參素等。研究表明DHI在大鼠腦缺血再灌注損傷模型提

3、高SOD、GSH水平，降低MDA水平，增加Nrf2、HO-1、NQO1表達抗氧化應激損傷以保護腦組織;DHI可促進入外傷性腦出血的血腫吸收，改善預后。臨床上常在ICH亞急性期（2周后）開始使用DHI，其能夠促進血腫吸收，改善預后，但亞急性期后ICH對個體造成的神經(jīng)功能損傷大多已不可逆。
　　因此本研究通過實驗性腦出血大鼠模型探討DHI能否用于腦出血的急性期治療，并通過其抗氧化作用探討治療ICH的可能性機制，為ICH的治療提供新策略

4、。
　　方法：
　　選取老年（18月齡）雄性SD大鼠(體重600-700g)12只，于造模后6h、24h、48h、72h、7d、14d進行MRI掃描，分別獲取T1WI、T2WI序列，觀察血腫隨時間的變化。
　　隨機分組:①sham組、②空白對照組（vehicle-ICH組）、③丹紅組(DHMCH組)。在上述頭顱MR掃描基礎上，選取1d、3d、7d開始對①sham組、②vehicle組、③DHI組各12只，分別給與滅菌用

5、水、滅菌用水、DHI（1.0ml/kg），腹腔注射1次，連續(xù)給藥3d。記錄三組大鼠(1)體重變化:1d、3d、7d、14d;(2)神經(jīng)功能缺陷評分:1d、3d、7d、14d（mNSS評分表）;(3)頭顱MRI掃描(14d):評估血腫體積;(4)腦含水量變化(14d);(5)組織學評估血腫體積(14d)。統(tǒng)計分析上述結果，得出結論。免疫熒光:選取上述結果三組的腦片分別進行雙標:NeuN、Prx1，GFAP、Prx1，Iba-1、Prx1;

6、對比3組不同細胞內Prx1的表達變化。加用Prx1抑制劑Chelerythrine:再次分組造模④ICH+Chelerythrine組(n=12);⑤ICH+DMSO組(n=12)，ICH術后第1-3d給與DHI干預，觀察上述指標變化，分析結果。
　　結果：
　　1.腦出血后大鼠死亡率、血腫體積、體重、行為學變化情況
　　在大鼠腦出血造模后至14天，其死亡率為(14.29％，2/14)。MRI顯示大鼠腦出血后血腫體積隨

7、時間呈現(xiàn)出不同表現(xiàn)（見圖1A-G）。體重變化表現(xiàn)為:自造模后至第3天體重逐漸下降，在第7天時有回升，14天時較第7天有改善（見圖1H）。行為學變化:總的神經(jīng)功能評分呈下降趨勢(見圖1I)。
　　2.丹紅注射液治療腦出血后大鼠的療效觀察
　　從干預后大鼠死亡率、體重、行為學、血腫體積、腦含水量方面進行評估
　　2.1大鼠死亡率、體重變化及行為學變化
　　①sham組、②空白對照組（vehicle-ICH組）、③丹紅

8、組（DHMCH組）大鼠死亡率(0％，0/36vs14.29％，6/42vs12.20％，5/41)，②vehicle-ICH組及③DHMCH組對比死亡率未見顯著差異。體重變化:DHI1-3d組在ICH后7天和14天均有顯著變化（圖2A，P＜0.05）;DHI3-5d組在第14天時體重增加有統(tǒng)計學意義（圖2B，P＜0.05），在7天時雖有提升，無統(tǒng)計學意義（圖2B，P＞0.05）;DHI7-9d組14天時有統(tǒng)計學意義（圖2C，P＜0.05

9、）。行為學變化:DHI1-3d組在ICH后3天即呈現(xiàn)顯著變化（圖3E）;DHI3-5d組及DHI7-9d組第14天NDS評分降低有統(tǒng)計學意義（圖3E-G，P＜0.05）。
　　體重變化及行為學:DHI1-3d組與DHI3-5d組及DHI7-9d組比較3d及14d時有顯著差異（圖2D/3H，P＜0.05）。
　　2.2大鼠血腫體積及腦水腫情況
　　血腫體積:通過頭顱MRI掃描及CV染色觀察，DHI組均較對照組有差異（P＜

10、0.05,圖4-5/表2），但DHI1-3d組在14天時病灶體積顯著小于DHI3-5d組及DHI7-9d組（圖5D/表2，P＜0.05）。
　　腦水腫情況:通過腦含水量變化間接反映，在ICH后14天DHI1-3d組顯著小于DHI3-5d組，DHI7-9d組及vehicle組（圖6，P＜0.05）。
　　3.丹紅注射液發(fā)揮抗氧化作用的機制研究
　　Prx1在腦出血后前3天主要表達于神經(jīng)元，12小時達峰后隨時間變化逐漸減少

11、，而7天時卻主要表達于星形膠質細胞，14天可見下降(圖7-9/11A)。給與DHI干預后，星形膠質細胞內Prx1表達水平顯著增加，并可延緩其14天時的下降（圖10/11B，P＜0.05）。
　　4.抑制劑干預后觀察丹紅注射液療效
　　給與抑制劑Chelerythrine后，第④ICH+Chelerythrine組的體重增加在第3，7，14d顯著小于第⑤ICH+DMSO組，NDS較對照組均未見顯著降低，血腫體積未見顯著縮小，腦