丹紅注射液對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎并發(fā)心肌損害的防治作用及機(jī)制.pdf

1、第一部分大鼠重癥急性胰腺炎并發(fā)心肌損害動(dòng)物模型的建立
　　 目的：建立可操作性、重復(fù)性及穩(wěn)定性較好的大鼠SAP相關(guān)的AMI動(dòng)物模型,觀察在重癥急性胰腺炎病程中急性心肌損害的形態(tài)學(xué)、心肌酶譜(CK-MB)、肌鈣蛋白I(cTnI)變化規(guī)律。方法：采用對(duì)照性實(shí)驗(yàn)研究，把60只雄性S-D大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，各30只，采用腹腔注射25％濃度L．精氨酸（劑量3.2g/kg體重）兩次，間隔1h，于第二次注射L-Arg后24hSAP大鼠

2、成模。全部大鼠于成模后4h、8h、12h各時(shí)間點(diǎn)分別隨機(jī)10只取樣，光鏡觀察胰腺、心肌組織病理標(biāo)本，電鏡觀察心肌組織標(biāo)本，采集胸主動(dòng)脈血，測(cè)定血清心CK-MB、cTnI。
　　 結(jié)果：1．胰腺及心肌光鏡改變：
　　 (1)胰腺：SAP大鼠出現(xiàn)胰腺葉間隔、小葉間隔間隙增寬，腺泡水腫、出血、壞死，。小葉結(jié)構(gòu)破壞，多為凝固性壞死，殘留腺泡呈孤立性分布，腺管壞死，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，病理改變隨病程進(jìn)展而逐漸加重；對(duì)照組大鼠胰腺結(jié)構(gòu)正常

3、。(2)心?。篠AP大鼠心肌細(xì)胞腫脹，部分細(xì)胞崩解、心肌纖維結(jié)構(gòu)消失，心肌纖維周圍有數(shù)量多少不等的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，病理程度改變隨病程進(jìn)展而逐漸加重；對(duì)照組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)正常。2．心肌電鏡改變：SAP組：彌漫性心肌細(xì)胞腫脹、細(xì)胞核及線粒體腫脹，線粒體嵴消失，肌漿網(wǎng)擴(kuò)張，肌原纖維部分?jǐn)嗔眩〗z分解；對(duì)照組：心肌細(xì)胞亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，肌膜及細(xì)胞器結(jié)構(gòu)完整，形態(tài)正常。3．血清CK-MB、cTnI濃度的變化：SAP大鼠成模4h開始出現(xiàn)cTnI、CK

4、-MB水平升高，8h進(jìn)一步增高，至12h達(dá)到峰值，各時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)血清CK-MB、cTnI濃度在正常范圍內(nèi)，各時(shí)間點(diǎn)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

5、化變化與SAP的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，表明AMI是SAP的發(fā)病與病情進(jìn)展過程中的嚴(yán)重并發(fā)癥。
　　 第二部分內(nèi)皮素、一氧化氮及粘附分子在大鼠重癥急性胰腺炎并發(fā)心肌損害中作用機(jī)制
　　 目的：探討內(nèi)皮素、一氧化氮及粘附分子在大鼠重癥胰腺炎并發(fā)的心肌損害中的作用機(jī)制。材料與方法：把60只雄性S-D大鼠隨機(jī)分為SAP模型組各30只，按照第一部分的方法制造SAP模型，對(duì)照組、SAP組于建立模型后4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)各時(shí)點(diǎn)分別提取

6、存活大鼠心肌組織，以實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法(Real-timefluorescencequantitativepolymerasechainreaction，RT-FQ-PCR)檢測(cè)與微循環(huán)障礙密切相關(guān)的血管活性介質(zhì)(endothelin，ET;nitricoxide，NO)和粘附分子(P-selectin、ICAM-1、VCAM-1)的基因的表達(dá)。同時(shí)采集胸主動(dòng)脈血，離心后測(cè)定血清中上述血管活性介質(zhì)和粘附分子基因表達(dá)產(chǎn)物的濃度，以

7、闡明微循環(huán)障礙在大鼠重癥胰腺炎相關(guān)的心肌損害中作用。結(jié)果：1．與微循環(huán)障礙密切相關(guān)的血管活性介質(zhì)和粘附分子的基因表達(dá)：對(duì)照組的各時(shí)間點(diǎn)TE-1、eNOS、iNOS、ICAM-1、P-selectin-mRNA的PCR產(chǎn)物RQ值處于較低水平，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SAP組4h、8h、12h各時(shí)間點(diǎn)相關(guān)基因的表達(dá)(mRNA的PCR產(chǎn)物RQ值)較對(duì)照組相同時(shí)間點(diǎn)顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2．血清ET-1、P-sele

8、ctin、IVAM-1、ICAM-1濃度的變化及iNOS、eNOS的活性變化：對(duì)照組大鼠的ET-1、P-selectin、IVAM-1、ICAM-1血清濃度及血清iNOS、eNOS活性處于較低水平，SAP組大鼠從成模術(shù)后4h、8h、12h各時(shí)間點(diǎn)ET-1、P-selectin、IVAM-1、ICAM-1血清水平較對(duì)照組顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。iNOS、eNOS的活性從成模術(shù)后4h開始升高，8h進(jìn)一步增高，至12h達(dá)到

9、峰值。結(jié)論：1.SAP致大鼠急性心肌損害時(shí)，心肌組織中ET-I-mRNA、iNOS-mRNA、P-selectin-mRNA、VCAM-I-mRNA、ICAM-I-mRNA表達(dá)顯著升高，表明這些血管活性物質(zhì)和粘附分子參與了SAP并發(fā)的AMI；eNOS-mRNA表達(dá)也顯著升高，但是和iNOS-mRNA相比，其表達(dá)相對(duì)不足，其保護(hù)作用受到削弱。2．大鼠SAP并發(fā)AMI是，血清ET-1、P-selectin、VCAM-1、ICAM-1濃度和血

10、清iNOS活性較對(duì)照組顯著上升，血清e(cuò)NOS活性和iNOS活性相比，其效應(yīng)下降；心肌組織局部和血液循環(huán)中的血管活性物質(zhì)和粘附分子共同參與了AMI的病理過程。
　　 第三部分丹紅注射液對(duì)大鼠重癥胰腺炎并發(fā)心肌損害的防治作用
　　 目的：探討丹紅注射液對(duì)大鼠重癥胰腺炎并發(fā)心肌損害的防治作用及機(jī)制。材料與方法：把60只雄性S-D大鼠隨機(jī)分為SAP模型組和治療組各30只，按照第一部分的方法制造SAP模型。于建立模型后4小時(shí)、8小

11、時(shí)、12小時(shí)各時(shí)點(diǎn)分別提取存活大鼠心肌組織。以實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法(Rcal-timefluorescencequantitativepolymerasechainreaction,RT-FQ-PCR)檢測(cè)與微循環(huán)障礙密切相關(guān)的炎癥介質(zhì)(endothelin，ET;nitricoxide，NO)和粘附分子(P-selectin、ICAM-1、VCAM-1)的基因的表達(dá)。同時(shí)采集胸主動(dòng)脈血，離心后測(cè)定血清中CK-MB、cTnI和上述

12、炎癥介質(zhì)和粘附分子基因表達(dá)產(chǎn)物的濃度。結(jié)果：1．內(nèi)皮素、一氧化氮及粘附分子等與微循環(huán)障礙密切相關(guān)的炎癥介質(zhì)和粘附分子的基因表達(dá)：治療組4h、8h、12h各時(shí)間點(diǎn)ET-1、P-selectin、IVAM-1、ICAM-1及iNOS基因的表達(dá)(mRNA的PCR產(chǎn)物RQ值)較SAP相同時(shí)間點(diǎn)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組12h時(shí)間點(diǎn)eNOS-mRNA的PCR產(chǎn)物RQ值較SAP相同時(shí)間點(diǎn)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0

13、5)。2．血清CK-MB、cTnI、ET-1、P-selectin、IVAM-1、ICAM-1濃度的變化及iNOS、eNOS的活性變化：SAP組大鼠的CK-MB、cTnI、ET-1、P-selectin、IVAM-1、ICAM-1血清濃度及血清iNOS、eNOS活性處于較高水平，治療組大鼠各時(shí)間點(diǎn)CK-MB、cTnI、ET-1、P-selectin、IVAM-1、ICAM-1血清濃度和iNOS的血清活性較SAP組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

14、義(P<0.05)，血清e(cuò)NOS的活性較SAP組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；3．心肌光鏡病理學(xué)改變：SAP組心肌細(xì)胞腫脹，部分細(xì)胞崩解，心肌纖維結(jié)構(gòu)消失，心肌纖維周圍有數(shù)量多少不等的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，病理程度改變隨病程進(jìn)展而逐漸加重；治療細(xì)胞排列結(jié)構(gòu)基本正常，心肌間隙水腫，肌纖維結(jié)構(gòu)部分消失、紊亂，其間可見少許炎細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論：1．丹紅注射液可以下調(diào)心肌組織ET、P-selectin、ICAM-1、VCAM-1、iNOS基因