Blimp--1通過介導(dǎo)PD--1-PD--L1途徑對自身免疫性甲狀腺炎導(dǎo)致流產(chǎn)的作用及影響.pdf

1、多項(xiàng)研究表明，母體甲功正常的自身免疫性甲狀腺炎(AIT)與流產(chǎn)相關(guān)，然而具體機(jī)制尚未闡明。AIT的疾病特征為淋巴細(xì)胞浸潤甲狀腺內(nèi)部和甲狀腺產(chǎn)生自身抗體。甲狀腺過氧化物酶抗體(thyroid-peroxidase antibody，TPOAb)和甲狀腺球蛋白抗體(thyroglobulin antibody，TgAb)是重要的標(biāo)志性抗體。一項(xiàng)大型甲狀腺疾病狀況調(diào)查發(fā)現(xiàn)TPOAb陽性的育齡婦女人數(shù)較多，約占12.9％，陽性者病理性妊娠發(fā)病率

2、為8.6％。母體甲功正常的自身免疫性甲狀腺炎所導(dǎo)致的最為常見也是最為嚴(yán)重的不良妊娠結(jié)局是流產(chǎn)和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。
　　調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cells，Treg)在自身免疫疾病導(dǎo)致流產(chǎn)的過程中有著舉足輕重的地位。已經(jīng)證實(shí)，程序性細(xì)胞死亡分子-1(programmed cell death-1，PD-1)/程序性死亡配體-1(programmed cell death Gilligan，PD-L1)共刺激途徑的增強(qiáng)或者阻

3、斷直接與自身免疫病致流產(chǎn)相關(guān)。而該通路對Treg的作用主要是通過抑制蛋白激酶B/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)信號傳導(dǎo)來實(shí)現(xiàn)的。PD-1/PD-L1負(fù)性共刺激信號能夠使下游mTOR表達(dá)下調(diào)，進(jìn)一步調(diào)控T細(xì)胞的分化、增殖、代謝和生存。B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)成熟蛋白1(Blimp-1)在自身免疫性疾病導(dǎo)致的流產(chǎn)中也起重要作用。Blimp-1作為轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)節(jié)T細(xì)胞和B細(xì)胞終末分化的過程中起到抑制性作用，它通過直接結(jié)合PD-1啟動(dòng)子以及抑

4、制活化T細(xì)胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells，cytoplasmic1，NFATc1)表達(dá)，從而抑制PD-1。
　　胚胎對于母體屬于一種異物，妊娠過程其實(shí)是母體對胚胎這一抗原進(jìn)行妥協(xié)促使自身發(fā)生免疫耐受，這種母胎耐受包含母胎界面發(fā)生的免疫耐受和外周界面發(fā)生的免疫耐受。免疫耐受過程對胎兒的成長發(fā)育至關(guān)重要，如果在過程中任何一種免疫耐受發(fā)生失衡，母體對胎兒則會表現(xiàn)出免疫排斥，產(chǎn)生抗體攻擊

5、胎兒，導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生。但在自身免疫性甲狀腺炎導(dǎo)致的流產(chǎn)中Blimp-1，PD-1/PD-L1，mTOR以及Treg之間有何種相互作用及影響，少見報(bào)道。
　　目的:
　　本研究旨在探討在AIT所致流產(chǎn)中Blimp-1對PD-1/PD-L1的影響以及對下游mTOR，Treg的作用。
　　方法:
　　(1)AIT動(dòng)物模型構(gòu)建:以小鼠甲狀腺球蛋白(mTg)皮下注射CBA/J雌鼠體內(nèi)，動(dòng)物狀態(tài)平穩(wěn)后與Balb/c雄鼠合籠構(gòu)

6、建自身免疫性甲狀腺炎孕鼠流產(chǎn)模型。(2)留取血清，取完整甲狀腺、胎盤、脾。(3)應(yīng)用免疫組織化學(xué)法與免疫組織熒光法檢測胎盤與脾臟Blimp-1、PD-1/PD-L1、mTOR及Treg代表性分子Foxp3蛋白的表達(dá)。(4)應(yīng)用Western blot（免疫蛋白印跡法）檢測胎盤與脾臟Blimp-1;PD-1/PD-L1;mTOR及Foxp3的表達(dá)水平。(5)分析在胎盤與脾臟中Blimp-1、PD-1/PD-L1與mTOR以及Treg變化水

7、平相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　(1)與con組相比較，Tg組雌鼠血清中TgAb較高(P＜0.05);甲狀腺HE顯示有甲狀腺內(nèi)有大量淋巴細(xì)胞浸潤，濾泡細(xì)胞被破壞，模型構(gòu)建成功。
　　(2)免疫組化結(jié)果顯示，與con組相比mTg組Blimp-1、mTOR在胎盤的表達(dá)量增加;PD-1、PD-L1表達(dá)降低;免疫熒光結(jié)果表明mTg組Foxp3的表達(dá)也顯著低于con組。
　　(3)Western blot結(jié)果顯示，Blimp-

8、1、mTOR在胎盤表達(dá)量顯著高于con組(P＜0.05);與con組相比，mTg組PD-1、PD-L1以及Foxp3均降低(P＜0.05)。
　　(4)脾臟IHC-P（免疫組化）顯示，mTg組Blimp-1和mTOR在胎盤的表達(dá)量增加而PD-1、PD-L1、Foxp3顯著降低。
　　(5)脾臟Western blot結(jié)果稍有差異，與con組相比mTg組Blimp-1顯著增加(P＜0.05);PD-1、PD-L1以及Foxp3

9、顯著降低(P＜0.05);而mTg組mTOR與con組對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)200μg小鼠Tg蛋白(mTg)免疫CBA/J雌鼠可成功構(gòu)建單純TgAb陽性的AIT流產(chǎn)動(dòng)物模型:在妊娠期間會出現(xiàn)淋巴細(xì)胞浸潤，甲狀腺濾泡細(xì)胞破壞，并且實(shí)驗(yàn)組小鼠胚胎吸收率明顯增加，胚胎發(fā)育異常且小鼠Tg蛋白(mTg)免疫后實(shí)驗(yàn)組小鼠體內(nèi)出現(xiàn)較高Tg抗體滴度;(2)TgAb陽性孕鼠Blimp-1的異常增多可能