mGITRL促進(jìn)小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎的作用.pdf

1、目的：探討小鼠GITRL蛋白(mGITRL)在小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎(EAT)發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用,進(jìn)一步研究其作用機(jī)制及其作為預(yù)防治療靶點(diǎn)的可能性。
　　 方法：⑴首先獲取小鼠甲狀腺球蛋白(mTg)和mGITRL蛋白,并純化和鑒定；⑵根據(jù)文獻(xiàn),應(yīng)用小鼠甲狀腺球蛋白誘導(dǎo)CBA小鼠,建立小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎(EAT)模型；⑶對(duì)EAT模型小鼠分組進(jìn)行干預(yù):尾靜脈分別注射mGITRL蛋白、對(duì)照蛋白(變性mGITRL)和P

2、BS；⑷ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清中甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)水平和特異性；⑸對(duì)各組小鼠甲狀腺進(jìn)行病理切片和HE染色,觀察甲狀腺病理變化情況；⑹檢測(cè)小鼠甲狀腺組織、局部淋巴結(jié)以及脾臟中Th17細(xì)胞的變化。
　　 結(jié)果：①成功建立了小鼠甲狀腺球蛋白誘導(dǎo)的小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎EAT模型,EAT模型小鼠體內(nèi)檢測(cè)出自身甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)和甲狀腺組織可見淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)；并且比較三組不同干預(yù)對(duì)EAT模型小鼠的作用結(jié)果發(fā)

3、現(xiàn):用mGITRL蛋白干預(yù)的EAT模型小鼠的自身甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)的水平和甲狀腺組織淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)程度都比對(duì)照蛋白(變性mGITRL)和PBS干預(yù)組高。②對(duì)三組不同干預(yù)的EAT模型小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)后發(fā)現(xiàn),與EAT組小鼠(8.50×107±1.40×107)和CTL-EAT組小鼠(8.75×107±2.25×107)相比,GITRL-EAT組小鼠用脾臟中細(xì)胞數(shù)目顯著性增加(1.13×108±2.40×107)；同時(shí)經(jīng)流式細(xì)

4、胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),小鼠脾臟中Th17細(xì)胞的比例,與EAT組小鼠(4.83％)和CTL-EAT組小鼠(4.79％)相比,GITRL-EAT組小鼠(6.96％)脾臟中Th17細(xì)胞的比例顯著性升高；小鼠頸部淋巴結(jié)中Th17細(xì)胞的比例,與EAT組小鼠(1.00％)和CTL-EAT組小鼠(1.28％)相比,GITRL—EAT組小鼠(1.92％)頸部淋巴結(jié)中Th17細(xì)胞的比例顯著性升高。③用qRT-PCR測(cè)定三組不同干預(yù)的EAT模型小鼠的甲狀腺組織中I

5、L-17表達(dá)發(fā)現(xiàn):GITRL-EAT組小鼠甲狀腺組織中IL-17表達(dá)量明顯高于CTL-EAT組和EAT組。
　　 結(jié)論：通過(guò)對(duì)小鼠甲狀腺球蛋白誘導(dǎo)的小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎模型干預(yù)研究顯示,mGITRL蛋白增加了模型小鼠的自身甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)水平和甲狀腺組織的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),這就說(shuō)明mGITRL蛋白可以加速并加重小鼠EAT的發(fā)病過(guò)程；mGITRL蛋白增加了模型小鼠的脾臟中Th17細(xì)胞的比例和甲狀腺組織中IL-17表