SAA通過TLR4信號通路促進(jìn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血管新生的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）是一種慢性炎癥性疾病，其發(fā)病特點(diǎn)主要為對稱性的多關(guān)節(jié)滑膜炎和大量新生血管的形成。已有研究結(jié)果顯示血清淀粉樣蛋白 A（SAA）在其發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。本研究首先分析了TLR4在RA患者滑膜組織中的表達(dá)，并進(jìn)一步檢測了SAA與TLR4的相互作用對HUVECs產(chǎn)生促血管生成因子VEGF，Ang-1，Ang-2的影響。最后，通過體外構(gòu)建三維血管模型，深入探討SAA與TLR4結(jié)合介導(dǎo)的NFκB信號途徑在

2、RA新生血管形成機(jī)制中的作用。本研究旨在探究SAA促進(jìn)RA血管新生的分子機(jī)制，為RA的臨床診斷和治療尋找新的可靠的靶點(diǎn)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測RA和OA患者滑膜組織中TLR4的表達(dá)。
　　2.采用HUVECs體外細(xì)胞培養(yǎng)模型，細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)分析SAA與TLR4的相互作用對內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖的影響。
　　3.通過體外構(gòu)建三維血管模型，分析SAA與TLR4的相互作用對內(nèi)皮細(xì)胞

3、形成新生血管的影響。
　　4. ELISA方法分析SAA與TLR4的相互作用對內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生促血管生成因子的影響。
　　5.采用western blot方法分析在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）中SAA-TLR4相互作用對NFκB信號途徑活化的影響。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化結(jié)果顯示，TLR4廣泛表達(dá)于RA滑膜組織的襯里層及襯里下層，主要表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及血管周圍；而在OA則少量表達(dá)于滑

4、膜襯里層及成纖維細(xì)胞,且二者相比表達(dá)的量和位置均有顯著差異。
　　2.細(xì)胞遷移、MTT實(shí)驗(yàn)以及體外三維血管模型結(jié)果分別顯示，SAA可顯著促進(jìn)HUVECs的增殖和遷移，以及相互連接構(gòu)成新生血管；在 TLR4被抑制后，SAA介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖程度以及血管新生明顯受到抑制。
　　3. ELISA結(jié)果顯示SAA作用下HUVECs可產(chǎn)生VEGF、Ang-1、Ang-2等促進(jìn)新生血管形成的因子，而TLR4被抑制后，VEGF的生成

5、明顯減少，其他幾種因子所受影響不明顯。
　　4.Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HUVECs受SAA刺激后，NFκB分子明顯活化，而一旦TLR4被抑制，NFκB的活化受到明顯抑制。
　　5.細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)以及體外三維血管模型結(jié)果分別顯示，在SAA作用下，HUVECs發(fā)生明顯的遷移，并且相互連接構(gòu)成新生血管；上述結(jié)果在NFκB被抑制后，明顯受到抑制。
　　結(jié)論:
　　1. TLR4在RA滑膜組織中呈高表達(dá)，且TL