魚藤素聯(lián)用L-肌肽的增效減毒作用研究.pdf

1、魚藤素是一種天然的魚藤酮類化合物，其抗瘤譜廣泛，對肺癌、乳腺癌、宮頸癌、結腸癌、前列腺癌、頭頸癌等多種腫瘤具有良好的抗腫瘤效應。目前魚藤素的應用受限于其帕金森樣神經毒性，然而目前針對魚藤素神經毒性的研究較少，因此，對魚藤素的神經毒性進行研究，尋找合適的降低魚藤素神經毒性的方法尤為迫切。L-肌肽是一種內源性二肽，其抗氧化作用和抑制α-突觸核蛋白(α-synuclein，α-SYN)聚集的作用能有效保護神經元細胞，對延緩帕金森病(Parki

2、nson's disease，PD)進程具有重要意義。近年來多項體內外研究報道L-肌肽具有抗腫瘤作用，因此，聯(lián)合應用L-肌肽和魚藤素，可能起到協(xié)同抗腫瘤作用以及降低魚藤素神經毒性的作用。
　　本文的研究內容如下:
　　(1)CCK-8法測定魚藤素對SH-SY5Y細胞的增殖的抑制作用;采用流式細胞術檢測處理后各組細胞內的凋亡率和活性氧(Reactive oxygen species，ROS)水平，驗證魚藤素是否通過氧化應激誘導

3、細胞凋亡;采用分光光度法測定caspase-3活化程度，進一步驗證魚藤素對SH-SY5Y細胞凋亡的誘導作用。
　　(2)檢測不同濃度L-肌肽對SH-SY5Y細胞增殖的影響;選取合適濃度的L-肌肽，CCK-8法測定L-肌肽和魚藤素共同處理對SH-SY5Y細胞增殖的影響;流式細胞術檢測L-肌肽和魚藤素共同處理對SH-SY5Y細胞凋亡和ROS水平的影響，驗證L-肌肽是否通過其抗氧化活性發(fā)揮神經保護作用。
　　(3)采用Wester

4、n-blot/Q-PCR法在分子水平上（蛋白/mRNA水平）檢測L-肌肽和魚藤素作用后對SH-SY5Y細胞的目的基因α-SYN、parkin表達量的影響。
　　(4)選取H1299細胞為腫瘤細胞模型，采用Chou-Talary法評價L-肌肽和魚藤素聯(lián)合用藥的抗腫瘤活性。
　　本文結果如下:
　　(1)魚藤素呈濃度依賴性抑制SH-SY5Y細胞增殖，誘導細胞凋亡，其機制可能與氧化應激有關。
　　(2)L-肌肽對魚藤素

5、誘導的神經細胞凋亡和抑制增殖具有一定程度的保護作用;L-肌肽共處理組細胞的ROS水平顯著降低，提示L-肌肽可能通過其抗氧化活性發(fā)揮保護作用。
　　(3)魚藤素可能不是通過上調α-SYN誘導帕金森樣神經毒性，其神經毒性可能與下調parkin基因表達相關。L-肌肽可能通過減輕魚藤素對parkin基因的抑制作用，從而保留了parkin蛋白的神經保護作用。
　　(4)魚藤素和L-肌肽聯(lián)合應用具有協(xié)同抑制H1299細胞增殖效應，且在本