千金藤素對(duì)化療藥物減毒增效及抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用研究.pdf

1、腫瘤是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病之一，目前治療癌癥的手段主要是手術(shù)切除、放療或化療。對(duì)于較早期未擴(kuò)散或轉(zhuǎn)移的癌灶，采用手術(shù)切除或放療較為成功，但對(duì)于發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于晚期的腫瘤患者則不甚理想；而且放、化療在殺死癌細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)增殖旺盛的正常細(xì)胞也有一定影響，導(dǎo)致嘔吐、腹瀉、脫發(fā)和骨髓抑制等不良反應(yīng)，嚴(yán)重影響了患者的生存質(zhì)量。本課題分別從體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)兩個(gè)方面，研究了千金藤素聯(lián)合化療藥物對(duì)腫瘤的抑制作用，并探討了其提高機(jī)體免疫力、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋

2、亡、阻止腫瘤細(xì)胞侵襲等的可能機(jī)制。 通過(guò)口服千金藤素來(lái)明確其是否對(duì)腫瘤生長(zhǎng)具有抑制作用；進(jìn)行聯(lián)合化療藥物的抑瘤實(shí)驗(yàn)，明確千金藤素是否對(duì)化療藥具有增效作用；檢測(cè)白細(xì)胞、紅細(xì)胞及血清ALT和BUN等的水平、骨髓有核細(xì)胞的數(shù)目，明確千金藤素對(duì)荷瘤化療小鼠的一般藥理學(xué)指標(biāo)；分析千金藤素對(duì)脾臟、胸腺指數(shù)及白細(xì)胞的DNA的影響，明確千金藤素是否具有增強(qiáng)免疫的作用；然后，分別采用粘附分析實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、人工基底膜體外重建實(shí)驗(yàn)、明膠酶譜分析等方

3、法觀(guān)察千金藤素對(duì)人纖維肉瘤細(xì)胞HT1080等體外侵襲過(guò)程的影響；采用吖啶橙染色和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)千金藤素對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用；采用集落形成法測(cè)定千金藤素對(duì)腫瘤細(xì)胞惡性程度的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：1．千金藤素能夠劑量依賴(lài)性地抑制小鼠移植實(shí)體瘤的生長(zhǎng)，并對(duì)化療藥物有增效減毒作用。千金藤素明顯延長(zhǎng)荷瘤(S180)小鼠的生存期，腹腔注射千金藤素(20mg/kg體重)可使U14瘤重抑制率達(dá)30.8％(P＜0.01)；可使B16-F10

4、瘤重抑制率達(dá)35.8％(P＜0.01)。與模型組比較，小鼠生存時(shí)間延長(zhǎng)42.6％(P＜0.01)。千金藤素與CTX聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，抑瘤活性明顯提高(p＜0.01)。中、高劑量千金藤素(10、20mg/kg)與CTX聯(lián)用組的抑瘤率(分別為44.9％和62.5％)要高于CTX單用組(p＜0.05，p＜0.01)。中、高劑量千金藤素與CTX聯(lián)用后與單獨(dú)使用CTX比較，可使化療荷瘤小鼠外周紅細(xì)胞明顯增多(P＜0.01)，分別提高3.7％和8.3％，

5、可使小鼠外周血紅蛋白值明顯升高(P＜0.01)，分別提高7.3％和9.1％。千金藤素與CTX聯(lián)用后，治療組較正常組，白細(xì)胞下降幅度較少，與CTX組相比差異顯著(P＜0.01)；單獨(dú)使用CTX組的荷瘤小鼠血清ALT水平顯著高于正常組(P＜0.01)，千金藤素與CTX聯(lián)用后，與CTX單用組相比差異顯著(P＜0.01)；千金藤素與CTX聯(lián)用后，與CTX單用組相比較，小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)目顯著(P＜0.01)增多；千金藤素與CTX聯(lián)用后，小鼠脾淋

6、巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著(P＜0.01)升高。小鼠接種U14瘤株，千金藤素與CTX聯(lián)用后，荷瘤小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)有明顯的提升(P＜0.01)；千金藤素能夠劑量依賴(lài)性地預(yù)防環(huán)磷酰胺所致DNA損傷。以上結(jié)果說(shuō)明千金藤素對(duì)CTX抑瘤能夠產(chǎn)生一定的增效減毒作用。 2．千金藤素單獨(dú)作用能夠濃度依賴(lài)性地抑制人纖維肉瘤細(xì)胞HT-1080、肝癌細(xì)胞SMMC7721、Hela細(xì)胞等腫瘤細(xì)胞增殖(2～40μM)，藥物對(duì)上述腫瘤細(xì)胞的IC50值分別為1

7、2.37±1.64μM，12.58±1.05μM，11.83±1.33μM(處理48 hr)；而且千金藤素能夠誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡。經(jīng)AO/EB染色后，計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞，4μM千金藤素處理48小時(shí)SMMC7721細(xì)胞，細(xì)胞凋亡率可達(dá)24.7％(P＜0.01)。 3．千金藤素能夠抑制腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。與對(duì)照組比較，4μM藥物預(yù)處理48小時(shí)后，HT1080細(xì)胞的侵襲能力顯著降低(p＜0.01)。而且能夠劑量依賴(lài)性地顯著抑制腫瘤細(xì)胞與基底膜

8、的粘附，減弱腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力和侵襲力，降低基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)的活性和表達(dá)量，上調(diào)金屬蛋白酶組織抑制劑2(TIMP-2)的表達(dá)。 4．千金藤素低濃度、長(zhǎng)時(shí)間作用降低腫瘤惡性程度，千金藤素4μM長(zhǎng)時(shí)間處理SMMC7721細(xì)胞株。經(jīng)過(guò)50代的處理，克隆形成率逐漸降低，細(xì)胞倍增時(shí)間逐漸增加。 結(jié)論：千金藤素能夠劑量依賴(lài)性地抑制小鼠移植實(shí)體瘤的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)荷瘤小鼠的生存時(shí)間，與化療藥物環(huán)磷酰胺聯(lián)用，具有一定的增效減毒作