角質(zhì)細(xì)胞NMDA受體在復(fù)雜性區(qū)域疼痛綜合征痛覺過敏中的作用研究.pdf

1、目的:復(fù)雜性區(qū)域疼痛綜合征(complex regional pain syndrome，CRPS)是一種以痛覺過敏為主要表現(xiàn)的慢性、難治性臨床綜合征，嚴(yán)重危害患者生活質(zhì)量。既往研究表明，角質(zhì)細(xì)胞激活在外周疼痛傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，其上的α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid,AMPA)受體可參與帶狀皰疹后神經(jīng)痛的機(jī)制。與AM

2、PA受體同類的N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartic acid receptor，NMDA）受體在角質(zhì)細(xì)胞上也有表達(dá)，但其在痛覺過敏中的作用尚未明確。本研究擬探究角質(zhì)細(xì)胞NMDA受體在CRPS痛覺過敏中的作用，重點觀察其對促炎性細(xì)胞因子釋放、疼痛傳導(dǎo)和中樞膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響。
　　方法:①動物分組與干預(yù):本研究采用CRPS公認(rèn)的模型——大鼠慢性缺血后疼痛(chronic post-ischemia pain

3、，CPIP)模型，以NMDA受體激動劑NMDA、拮抗劑MK801皮下注射的干預(yù)方法驗證該受體作用。首先將雄性斯普拉格-道利(Sprague-Dawley，SD)大鼠分為急性期觀察組與慢性期觀察組:急性期觀察組于建模前3日開始連續(xù)給藥至建模日，慢性期觀察組于建模后7日開始連續(xù)給藥至第14日。急、慢性期觀察組均細(xì)分為CPIP組與假手術(shù)組:CPIP組以內(nèi)徑0.65cm的O型環(huán)于踝關(guān)節(jié)處勒緊右后肢，3小時后取下;假手術(shù)組以剪斷的環(huán)做相同處理。C

4、PIP組繼續(xù)細(xì)分為3組，分別予NMDA(1mM)、MK801(1mM)和生理鹽水100μl/日。②行為學(xué)和生理學(xué)測定:急性觀察組于建模后第6、12、18、24小時，慢性觀察組于建模后第2、6、10、14日測定機(jī)械痛閾(von-Frey法)、熱痛閾（熱板法）和皮溫（紅外線溫度計）。③取材:急、慢性觀察組分別于建模后24小時和14日取大鼠手術(shù)側(cè)皮膚及L2-L4脊髓。④Western Blot:測定皮膚組織NMDA受體固有亞基NR1表達(dá)水平，

5、以及皮膚和脊髓中腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的釋放水平。⑤免疫熒光染色:觀察皮膚組織角質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物pan-keratin與NR1共表達(dá)情況、脊髓背角傷害刺激傳入標(biāo)志物c-fos、小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物鈣離子結(jié)合調(diào)節(jié)分子1（ionized calcium binding adaptor molecule1，Iba-1）和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物神經(jīng)

6、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:①行為與生理學(xué):急性期和慢性期機(jī)械痛閾和熱痛閾比較:CPIP+NMDA組＜CPIP+生理鹽水組＜CPIP+MK801組＜假手術(shù)組;僅在急性期CPIP3組皮溫均高于假手術(shù)組，但3組間無顯著差異;②皮膚免疫熒光和Western Blot:在急、慢性期，角質(zhì)細(xì)胞上NMDA受體的表達(dá)均顯著升高。急性期TNF-α和IL-1β釋

7、放量組間比較:CPIP+NMDA組＞CPIP+生理鹽水組＞CPIP+MK801組或假手術(shù)組，慢性期各組間無顯著差異。③脊髓免疫熒光和Western Blot:CPIP+生理鹽水組較假手術(shù)組急、慢性期均見脊髓背角c-fos表達(dá)提高，僅在慢性期見Ibal和GFAP表達(dá)升高，三者的表達(dá)在CPIP+MK801組中均被抑制。慢性期可見脊髓TNF-α和IL-1β釋放量組間比較:CPIP+NMDA組＞CPIP+生理鹽水組＞CPIP+MK801組或假手