小檗堿提取物抑制多重耐藥大腸埃希菌外排喹諾酮類藥物的研究.pdf

1、近年來，由于病原菌特別是大腸桿菌對喹諾酮類藥物(Qs)耐藥性日益嚴重，使得Qs臨床治療效果嚴重降低，造成治療成本升高、養(yǎng)殖風險增大、藥物使用劑量加大、導致藥物殘留等食品安全問題。因此，如何提高Qs的治療效果，不僅事關(guān)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，更是關(guān)乎食品安全乃至人類健康的社會問題。從Qs耐藥性的產(chǎn)生特點及能否逆轉(zhuǎn)的角度，耐藥性控制和逆轉(zhuǎn)的研究主要集中在新藥開發(fā)與篩選理想的外排抑制劑上。新藥研發(fā)需要耗費大量的人力、物力、財力與時間，且開發(fā)出的新藥

2、又可能很快產(chǎn)生耐藥性，因此很難及時解決當前日益嚴重的耐藥性問題。外排抑制劑是能夠消除細菌等多重耐藥性的一類物質(zhì)，通過有效抑制主體的藥物轉(zhuǎn)運蛋白（外排泵）活性，包括細菌、癌細胞等，減少藥物排出量。中藥有效成分相對安全、殘留小、無耐藥性危害等，在產(chǎn)品研發(fā)與臨床應(yīng)用上具有明顯優(yōu)勢，所以具有外排抑制活性的天然藥物不僅能夠提高由外排泵介導耐藥病原菌對藥物的敏感性，還有利于減少由外排作用促進的耐藥突變株的產(chǎn)生，具有較大的臨床應(yīng)用價值，對于耐藥菌感染

3、的治療以及畜牧業(yè)的健康發(fā)展有著深遠的意義。本試驗通過前期篩選的中藥十大功勞為研究對象，提取其主要有效成分小檗堿，研究其是否具有抑制多重耐藥大腸埃希菌外排喹諾酮類藥物的作用，為后期外排泵抑制劑的確認奠定基礎(chǔ)，同時也為新外排抑制劑的研制提供理論依據(jù)。
　　 1、小檗堿提取物的制備
　　 采用乙醇回流提取法提取十大功勞中的有效成分小檗堿，并參照藥典方法對小檗堿提取物進行鑒別，采用高效液相色譜法(HPLC)對其進行含量測定。

4、r>　　 結(jié)果:乙醇回流提取法提取十大功勞中小檗堿的提取率為1.2％;經(jīng)鑒別均符合2010版中國藥典中鹽酸小檗堿項下的鑒別試驗;小檗堿對照品溶液回歸方程為:A=170931C+167702，線性范圍15～135μg/mL(r=0.9996)，測得所制備的小檗堿提取物含量為97.3％。
　　 結(jié)論:采用乙醇回流提取法提取小檗堿，經(jīng)精制后小檗堿的純度達到97.3％，該方法具有可行性;本試驗所建立的高效液相色譜檢測法結(jié)果準確可靠，可

5、作為小檗堿提取物的含量測定方法。
　　 2、小檗堿提取物體外抑菌試驗
　　 采用美國臨床實驗室標準委員會(NCCLS)推薦的肉湯稀釋法，分別測定乳酸環(huán)丙沙星(Cip)及小檗堿提取物對質(zhì)控菌ATCC25922及耐藥菌73-2的最小抑菌濃度(MIC)，并將小檗堿提取物與乳酸環(huán)丙沙星聯(lián)合，檢測其對乳酸環(huán)丙沙星抑菌效果的影響，以能量抑制劑碳酰氰間氯苯腙(CCCP)作為藥物對照。
　　 結(jié)果:乳酸環(huán)丙沙星對質(zhì)控菌ATCC2

6、5922及耐藥菌73-2的MIC值分別為0.0078μg/mL和256μg/mL，小檗堿提取物對質(zhì)控菌ATCC25922及耐藥菌73-2的MIC值分別為＞500mg/mL和＞500mg/mL。小檗堿提取物與乳酸環(huán)丙沙星聯(lián)合應(yīng)用，表現(xiàn)為乳酸環(huán)丙沙星對質(zhì)控菌ATCC25922的MIC值沒有變化，對耐藥菌73-2的MIC值變?yōu)?μg/mL，降為原來的1/64;CCCP與乳酸環(huán)丙沙星聯(lián)合應(yīng)用，表現(xiàn)為乳酸環(huán)丙沙星對質(zhì)控菌ATCC25922的MIC

7、值沒有變化，對耐藥菌73-2的MIC值變?yōu)?μg/mL，降為原來的1/32。
　　 結(jié)論:小檗堿提取物聯(lián)合乳酸環(huán)丙沙星能夠提高耐藥大腸埃希菌對乳酸環(huán)丙沙星的敏感性，表現(xiàn)出良好的耐藥抑制作用，且效果優(yōu)于CCCP。
　　 3、小檗堿提取物對受試菌株乳酸環(huán)丙沙星蓄積量的影響
　　 采用高效液相色譜法分別檢測質(zhì)控菌ATCC25922與耐藥菌73-2加與未加小檗堿提取物，細菌體內(nèi)乳酸環(huán)丙沙星(Cip)的蓄積量，并以CCCP

8、作為藥物對照。
　　 結(jié)果:加入小檗堿提取物后，質(zhì)控菌體內(nèi)乳酸環(huán)丙沙星蓄積量幾乎無變化，耐藥菌73-2菌體內(nèi)乳酸環(huán)丙沙星蓄積量明顯增加，約為未加小檗堿提取物組的2.62倍;加入CCCP后，質(zhì)控菌體內(nèi)乳酸環(huán)丙沙星蓄積量幾乎無變化，耐藥菌73-2菌體內(nèi)乳酸環(huán)丙沙星蓄積量明顯增加，約為未加CCCP組的2.25倍。
　　 結(jié)論:小檗堿提取物與CCCP均可以增加耐藥菌73-2菌體內(nèi)乳酸環(huán)丙沙星的蓄積量，表現(xiàn)出良好的外排抑制作用，且