果蠅Rgn蛋白多克隆抗體制備及其在天然免疫中的作用.pdf

1、天然免疫作為多細(xì)胞生物阻止外界微生物入侵的第一道防線，在機(jī)體防御機(jī)制中具有十分重要的作用。與哺乳動(dòng)物相比，黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）的天然免疫系統(tǒng)沒有與之相似的B淋巴細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞，也沒有能夠?qū)Ｒ蛔R(shí)別病原微生物的特異性免疫系統(tǒng)，但其能夠?qū)ξ⑸锔腥狙杆俣行У貞?yīng)答，說明果蠅具有能夠抵抗病原微生物入侵的高效的固有免疫系統(tǒng)。日前的研究結(jié)果表明，果蠅體內(nèi)存在著三種主要的天然免疫方式:分別是通過脂肪體產(chǎn)生的抗菌

2、肽來達(dá)到防御目的體液免疫，依靠漿細(xì)胞吞噬和包裹作用的細(xì)胞免疫，以及通過產(chǎn)生的黑色素沉積在傷口并殺傷病原體的黑化反應(yīng)。
　　再生蛋白(Regeneration，Rgn)是C型凝集素(C-type lectin)超家族成員之一，由一段信號(hào)序列和C型鈣離子依賴性凝集素結(jié)構(gòu)域(C-type Ca2+-dependent lectindomain，CTLD)組成，是rgn基因的編碼產(chǎn)物。研究表明，Rgn蛋白對(duì)于個(gè)體發(fā)育、組織再生和創(chuàng)傷修復(fù)具

3、有重要作用。其參與果蠅生長(zhǎng)發(fā)育的各階段，是果蠅生長(zhǎng)發(fā)育中不可或缺的重要蛋白之一。因Rgn蛋白在果蠅生長(zhǎng)發(fā)育中的重要作用以及rgn基因所含有的特殊的C型凝集素結(jié)構(gòu)域，推測(cè)其可能也參與了果蠅的天然免疫反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)通過比較野生型WT(w1118)與rgn缺陷型果蠅（gnRNAi）腹腔注射白假絲酵母菌孢子后生存率的變化認(rèn)識(shí)到由于Rgn蛋白的缺失，造成機(jī)體抵御真菌的能力明顯減弱;血細(xì)胞含量的比較實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)血細(xì)胞數(shù)量明顯升高的現(xiàn)象;此外，在生長(zhǎng)狀態(tài)

4、的比較中也觀察到了全身低表達(dá)蛹期致死及翅原基低表達(dá)導(dǎo)致翅脈異常發(fā)育的現(xiàn)象。這都說明由于Rgn蛋白的缺失導(dǎo)致果蠅機(jī)體出現(xiàn)了部分天然免疫功能的改變。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)對(duì)rgn缺陷型果蠅細(xì)胞的吞噬能力、細(xì)胞膜肌動(dòng)蛋白延展性以及創(chuàng)傷引起的黑化反應(yīng)能力進(jìn)行探究，與對(duì)照相比未出現(xiàn)明顯變化。
　　此外通過制備Rgn蛋白的多克隆抗體將從蛋白水平對(duì)Rgn蛋白進(jìn)行檢測(cè)，能夠更加直接、準(zhǔn)確的揭示其細(xì)胞定位及表達(dá)情況，為研究果蠅Rgn蛋白的生物學(xué)功能提供研究基礎(chǔ)