蔬菜病害生防菌的篩選、鑒定及其拮抗物質(zhì)理化性質(zhì)研究.pdf

1、目前,國內(nèi)外防治蔬菜病害以化學防治為主。化學農(nóng)藥的大量使用,在控制病害同時也造成了環(huán)境污染、農(nóng)產(chǎn)品有毒物質(zhì)殘留、危害人類健康和病原菌產(chǎn)生抗藥性等問題,嚴重制約了農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。因此,尋找安全、有效的病害防治途徑,是當前病害防治研究的重點。研究表明,生物防治是其中一種有效的防治途徑。本研究從蔬菜根際土壤中分離篩選到一株具廣譜抗性和促生長作用的生防細菌XJ。從菌種的分離篩選、鑒定、搖瓶發(fā)酵工藝和拮抗物質(zhì)理化性質(zhì)等方面進行了研究。結(jié)果如下:

2、
　　 1.采用梯度稀釋分離法,從浙江、福建、江西等地采集的160多份蔬菜根際土壤中分離獲得712株細菌。以禾谷鐮刀菌為指示菌,采用平板對峙法從分離到的712株細菌中篩選獲得30株可以抑制禾谷鐮刀菌生長的生防菌,其中有10株細菌對病原菌的抑制率達70％以上。采用平皿促生長法從30株生防菌中篩選出9株能促進黃瓜根生長的菌株。
　　 2.采用溫室盆栽試驗對初篩獲得的9株生防菌進行促生試驗。結(jié)果表明,9株生防菌對黃瓜的生長都有

3、促進作用,其中以AT2的促生長效果最好。通過溫室盆栽試驗篩選在黃瓜植株上有防病效果的生防菌。試驗結(jié)果表明,生防菌XJ、DE2、BN83個菌株對黃瓜炭疽病都有一定防治效果,其中以菌株XJ的防治效果最好。
　　 3·采用形態(tài)特征及生理生化檢測和16S rDNA序列分析等方法,對生防菌XJ進行菌種鑒定。形態(tài)特征和生理生化鑒定顯示,XJ屬于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)；16SrDNA序列測定和分析結(jié)果表明,XJ與枯

4、草芽孢桿菌(B.subtilis)的同源性達99％。因此,兩種鑒定方法的結(jié)果一致,菌株XJ為枯草芽孢桿菌(B.subtilis)。
　　 4.通過單因素試驗和正交試驗對菌株XJ的發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化,結(jié)果表明,XJ菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳配方為:蔗糖3％,蛋白胨1.5％,黃豆餅粉1％,K2HPO40.4％。同時對菌株XJ的發(fā)酵條件進行優(yōu)化,結(jié)果表明XJ菌株最佳發(fā)酵條件為:發(fā)酵溫度是37℃,初始pH值為9.0,接種量為2％,裝液量為7

5、5mL/300 mL,搖床轉(zhuǎn)速為200 rpm,發(fā)酵時間24 h。
　　 5.通過對XJ的拮抗物質(zhì)的定位研究發(fā)現(xiàn),XJ產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)是胞外物質(zhì)。通過硫酸銨分級鹽析法對XJ產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)進行了提取,發(fā)現(xiàn)當硫酸銨飽和度為20％時,沉淀的拮抗活性最大,隨著硫酸銨飽和度增加,沉淀的拮抗活性逐漸減弱。當硫酸銨飽和度達到80％時,沉淀基本無拮抗活性,因此,采用60％飽和度的硫酸銨基本可以將活性物質(zhì)全部沉淀下來。對拮抗物質(zhì)的理化性質(zhì)初步研究表