EL及MLCK在人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的表達(dá)研究.pdf

1、目前我國(guó)人民生活水平較前明顯提高,飲食習(xí)慣也有了很大的改變,而由此所導(dǎo)致的心腦血管疾病發(fā)病率則逐年上升,目前已經(jīng)躍居各病之首。究其原因,則大多是由于動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis AS)所導(dǎo)致,而由此所導(dǎo)致的并發(fā)癥已嚴(yán)重威脅我國(guó)中老年人群的身體健康。頸動(dòng)脈粥樣硬化是動(dòng)脈粥樣硬化在頸部血管的病理表現(xiàn),其發(fā)病將直接影響腦血管血液循環(huán),能夠?qū)е履X缺血甚至腦萎縮,而粥樣硬化斑塊的破裂脫落又可造成的腦栓塞,由此給患者的生活質(zhì)量帶來(lái)諸

2、多隱患。因此,研究頸動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病原因及機(jī)制,制定相應(yīng)的治療措施成為目前臨床迫切的需要。內(nèi)皮脂肪酶(EL)是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種促AS酶,它屬于甘油三酯脂肪酶基因家族,由內(nèi)皮細(xì)胞合成和分泌。研究發(fā)現(xiàn),EL可以促進(jìn)單核細(xì)胞及脂蛋白在血管內(nèi)皮下積聚,參與影響高密度脂蛋白代謝進(jìn)而使血管壁中膽固醇外流減少,因此其與AS的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。而肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)是一種依賴于Ca+/鈣調(diào)蛋白并能促使肌動(dòng)蛋白與肌球蛋白結(jié)合的絲氨酸/蘇氨酸蛋

3、白激酶,能夠使肌球蛋白輕鏈(MLC)磷酸化從而使血管內(nèi)皮細(xì)胞收縮及張力增加,導(dǎo)致血管內(nèi)皮的通透性加大,進(jìn)而使炎細(xì)胞及脂質(zhì)等易于滲入血管內(nèi)皮并沉積,從而導(dǎo)致AS的發(fā)生。因此,本實(shí)驗(yàn)旨在從蛋白及基因的水平研究EL及MLCK在人頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的表達(dá)情況以及二者在不同性質(zhì)斑塊中的表達(dá)差異,分析二者的病理關(guān)系。以期初步探討二者在頸動(dòng)脈粥樣硬化中的致病機(jī)理。
　　 材料及方法:
　　 收集自2009年11月至2011年7月在鄭

4、州大學(xué)第二附屬醫(yī)院及第五附屬醫(yī)院血管外科行頸動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)(CEA)后頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊標(biāo)本40例,其中,男21例,女19例,平均年齡53.6歲。所有病例術(shù)前均有短暫性腦缺血(TIA)病史,并經(jīng)彩超診斷證實(shí)。同時(shí)選取20例脾切除術(shù)后脾動(dòng)脈標(biāo)本作為對(duì)照組,術(shù)前均排除動(dòng)脈硬化、全身炎性疾病、腫瘤等病史。所有實(shí)驗(yàn)標(biāo)本均經(jīng)家屬同意用于科學(xué)研究。
　　 所有標(biāo)本手術(shù)取下后,液氮罐保存,備用。根據(jù)術(shù)前頸部彩超診斷標(biāo)準(zhǔn)和術(shù)后對(duì)標(biāo)本的組織病理學(xué)

5、分析,將頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊分為兩組,即穩(wěn)定性斑塊組(20例)和不穩(wěn)定性斑塊組(20例)。20例正常脾動(dòng)脈組織作為對(duì)照。采用免疫組織化學(xué)法及逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)粥樣硬化斑塊組織及正常動(dòng)脈組織中EL、MLCK蛋白及mRNA的表達(dá):
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:本實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,采用單因素方差分析及LSD-t檢驗(yàn),Pearson相關(guān)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、意義。
　　 結(jié)果:
　　 一.免疫組織化學(xué)結(jié)果:
　　 1.EL在頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組中均有較強(qiáng)表達(dá),而在對(duì)照組中有少量表達(dá),其染色陽(yáng)性部位主要見于炎性細(xì)胞,定位在細(xì)胞質(zhì)。其在不穩(wěn)定性斑塊組染色強(qiáng)度明顯高于穩(wěn)定性斑塊組(P＜0.01)及對(duì)照組(P＜0.01)。且穩(wěn)定性斑塊組染色強(qiáng)度也高于對(duì)照組(P＜0.01).單因素方差分析發(fā)現(xiàn)三者均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=81.239,P＜0.01)。
　　 2.MLCK在

7、頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組中也均有較強(qiáng)的表達(dá),其染色陽(yáng)性部位見于炎性細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)。在不穩(wěn)定性斑塊組染色強(qiáng)度最高,明顯高于穩(wěn)定性斑塊組(P＜0.01)及對(duì)照組(P＜0.01),而穩(wěn)定性斑塊組染色強(qiáng)度也高于對(duì)照組(P＜0.01).單因素方差分析發(fā)現(xiàn)三者均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=1243.806,P＜0.01)。
　　 3.采用pearson相關(guān)性分析顯示EL及MLCK在頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中表達(dá)強(qiáng)度呈明顯的正相關(guān)關(guān)系(穩(wěn)定性斑塊:r=0.667,

8、P＜0.01;不穩(wěn)定性斑塊:r=0.732,p＜0.01),而二者在正常對(duì)照組中的表達(dá)則無(wú)相關(guān)性(r=0.101,P=0.672)。
　　 二.RT-PCR結(jié)果:
　　 1.ELmRNA在不穩(wěn)定性斑塊組中表達(dá)量最高,明顯高于穩(wěn)定性斑塊組(P＜0.01),而穩(wěn)定性斑塊組表達(dá)量又高于對(duì)照組(P＜0.01),單因素方差分析檢驗(yàn)三組之間表達(dá)均有差異(F=243.195,P＜0.01)。
　　 2.MLCKmRNA在粥樣斑

9、塊組織中也呈現(xiàn)較強(qiáng)表達(dá),其中不穩(wěn)定性斑塊組表達(dá)量最高,明顯高于穩(wěn)定性斑塊組(P＜0.01),而穩(wěn)定性斑塊組表達(dá)量又高于對(duì)照組(P＜0.01),單因素方差分析檢驗(yàn)三組表達(dá)均有差異(F=164.788,P＜0.01)。
　　 3.采用pearson相關(guān)分析顯示二者在斑塊組中表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)(穩(wěn)定性斑塊:r=0.529,P＜0.01;不穩(wěn)定性斑塊:r=0.575,p＜0.01),而在對(duì)照組中則無(wú)相關(guān)性(r=0.299,p=0.201)。