Pdlim2在高脂血癥大鼠腎小球足細(xì)胞中的表達(dá)改變及意義.pdf

1、隨著我國(guó)人民生活水平的提高，脂代謝紊亂的發(fā)病率也逐年上升，脂代謝紊亂不僅引發(fā)各種心腦血管病，而且高脂飲食既可加重腎病患者已有的腎損害，又會(huì)導(dǎo)致健康的腎臟受損。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，原發(fā)性脂代謝紊亂導(dǎo)致的腎損害可出現(xiàn)蛋白尿的臨床表現(xiàn)，其病理類型多為腎小球局灶性節(jié)段性硬化。
　　足細(xì)胞(Podocyte)是腎小球固有的細(xì)胞之一，它依靠其足突及其足突間的裂孔膜共同構(gòu)成腎小球?yàn)V過屏障的最外層，是阻止血漿蛋白丟失而形成蛋白尿的最后屏障。研究發(fā)現(xiàn)，足

2、細(xì)胞損傷早期以包括足突融合、消失為主的形態(tài)損傷和以足突與腎小球基底膜粘附功能損傷為特征，同時(shí)可伴有裂孔隔膜成分表達(dá)的異常，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過膜完整性破壞而出現(xiàn)蛋白尿。在后期，足細(xì)胞脫落、凋亡，數(shù)量密度減低，足細(xì)胞活化分泌炎癥介質(zhì)、分泌細(xì)胞外基質(zhì)，則與系膜細(xì)胞一起共同參與腎小球硬化的發(fā)生。近來的一些研究證實(shí)，脂代謝紊亂早期主要是導(dǎo)致腎小球足細(xì)胞的損傷，而不是系膜細(xì)胞的損傷。腎小球足細(xì)胞的這種足突融合及其相應(yīng)功能損害，可能是脂代謝紊亂腎損害最早

3、期的環(huán)節(jié)，而系膜細(xì)胞損傷及活化等這些病理機(jī)制，則多發(fā)生在脂代謝紊亂導(dǎo)致腎損害的后期。
　　Pdlim2是新發(fā)現(xiàn)在腎小球足細(xì)胞的足突中表達(dá)的一種肌動(dòng)蛋白(actin)調(diào)節(jié)蛋白，主要在足細(xì)胞的次級(jí)足突表達(dá)。Pdlim2蛋白是輔肌動(dòng)蛋白關(guān)聯(lián)的LIM蛋白(ALP)超家族的成員之一，存在于許多細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，它在N末端含有一個(gè)PDZ結(jié)構(gòu)域，在C末端含有一個(gè)LIM結(jié)構(gòu)域。LIM結(jié)構(gòu)域作為蛋白與蛋白之間相互作用的結(jié)構(gòu)域，在調(diào)節(jié)actin細(xì)胞骨架

4、的形成、細(xì)胞分化和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等中發(fā)揮重要作用。最近的研究發(fā)現(xiàn)，表現(xiàn)為腎病綜合征的微小病變型腎病綜合征(MCNS)和膜性腎病(MN)患者的足細(xì)胞中，Pdlim2的表達(dá)降低，且表現(xiàn)出明顯的足細(xì)胞足突回縮、消失，尿蛋白顯著增加。而Pdlim2在高脂血癥大鼠腎小球足細(xì)胞中的表達(dá)情況及變化卻很少有人研究。本研究通過建立高脂血癥大鼠模型，觀察高脂血癥大鼠及辛伐他汀治療高脂血癥大鼠模型24h尿蛋白、血清膽固醇(TC)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水

5、平等生化指標(biāo)，電鏡觀察大鼠腎小球足細(xì)胞的損害，免疫熒光染色法及免疫印跡(Western blot)檢測(cè)大鼠腎臟Pdlim2蛋白分布及表達(dá)的改變并探討其發(fā)生機(jī)制，為進(jìn)一步了解高脂血癥對(duì)腎臟早期的影響及干預(yù)提供理論依據(jù)。
　　目的:通過高脂飲食誘導(dǎo)法構(gòu)建高脂血癥大鼠模型，結(jié)合透射電鏡、免疫熒光、Western blot等檢測(cè)手段，觀察高脂血癥大鼠腎小球足細(xì)胞Pdlim2的表達(dá)變化，并探討辛伐他汀對(duì)其表達(dá)的干預(yù)作用及機(jī)制。
　　方

6、法:同品系6～8周齡SD雄性大鼠30只，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分入以下3組。每組各10只大鼠:正常對(duì)照組(NG)，給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng);高脂飲食組(HG)，按高脂血癥動(dòng)物模型方法自由進(jìn)食高脂飼料(2％膽固醇、0.3％去氧膽酸鈉、7.5％豬油、0.2％丙基硫氧嘧啶、5％蛋黃粉和85％基礎(chǔ)飼料）;辛伐他汀組(SG)，高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)給予辛伐他汀(10mg·kg-1·d-1)水溶液灌胃，每日1次，治療10周;正常對(duì)照組和高脂飲食組均自由進(jìn)水。于

7、高脂飲食喂養(yǎng)的第4周和第10周各組取5只大鼠處死，測(cè)定24h尿蛋白量、血清TC和LDL-C水平，電鏡觀察大鼠腎小球足細(xì)胞的損害，免疫熒光染色法及Western blot檢測(cè)大鼠腎臟Pdlim2蛋白分布及表達(dá)情況。數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，數(shù)據(jù)用SAS9.0軟件處理，多組資料比較采用單因素方差分析，兩組資料比較采用t檢驗(yàn)，P值＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:(1)高脂飲食飼養(yǎng)的大鼠血脂、尿蛋白定量的變化:H

8、G組和SG組大鼠的血清LDL-C和TC水平，從實(shí)驗(yàn)第4周開始均逐漸增加，在同一時(shí)間點(diǎn)上，HG組和SG組大鼠的血清LDL-C和TC水平分別與同期NG組比較，明顯升高，差異有顯著性(P＜0.05)，而SG組大鼠的血清LDL-C和TC較同期HG組明顯減低，兩兩比較，差異有顯著性(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)第10周時(shí)HG組和SG組大鼠尿蛋白水平較實(shí)驗(yàn)第4周(P＜0.05); SG組和HG組大鼠尿蛋白較NG組明顯升高，而SG組大鼠尿蛋白水平較同期HG組

9、明顯減低，兩兩比較，差異有顯著性(P＜0.05)。(2)高脂飲食飼養(yǎng)的大鼠腎臟足細(xì)胞損害:透射電鏡下觀察顯示，HG組大鼠腎小球于實(shí)驗(yàn)第4周時(shí)可見足細(xì)胞部分輕度足突融合;10周時(shí)可見足細(xì)胞足突廣泛融合、彎曲、增粗，足細(xì)胞水腫;SG組足細(xì)胞足突融合的其損害程度均輕于HG組。(3)免疫熒光染色觀察各組大鼠腎小球Pdlim2的表達(dá):NG組大鼠在實(shí)驗(yàn)第4周和第10周均可見腎小球內(nèi)有Pdlim2蛋白表達(dá)，HG組大鼠實(shí)驗(yàn)第4周腎小球內(nèi)Pdlim2蛋白

10、表達(dá)略有減少;而實(shí)驗(yàn)第10周時(shí)，HG組大鼠腎小球內(nèi)Pdlim2蛋白表達(dá)明顯減少，SG組大鼠腎小球內(nèi)Pdlim2蛋白表達(dá)均低于同期NG組大鼠，同時(shí)又高于HG組大鼠腎小球內(nèi)Pdlim2的表達(dá)。(4)免疫印跡(Western blotting)檢測(cè)高脂飲食大鼠腎小球Pdlim2蛋白表達(dá)的影響:實(shí)驗(yàn)第4周HG組大鼠腎組織Pdlim2蛋白表達(dá)較同期NG組大鼠減少27％，差異有顯著性（P＜0.05）;SG組和NG組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)第10周時(shí)，