Sp1在高糖誘導(dǎo)腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　糖尿病腎病（Diabetic nephropathy，DN）是糖尿病病人常見(jiàn)的重要并發(fā)癥之一，發(fā)病率在我國(guó)呈逐漸上升趨勢(shì)，隨著病情的進(jìn)展而成為終末期腎臟病，因此，研究者們盡量想了解糖尿病腎病中腎小球損傷的機(jī)制，希望發(fā)現(xiàn)新的治療策略。
　　足細(xì)胞是高度終末分化的腎小球臟層上皮細(xì)胞，覆蓋于腎小球基底膜(Glomerular basement membrane，GBM)外側(cè)，在腎小球功能的調(diào)節(jié)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用

2、。目前研究一致認(rèn)為足細(xì)胞在DN的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要的作用。足細(xì)胞損傷表型改變的主要特征為細(xì)胞凋亡，體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均證實(shí)高糖(HG)誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡，從而引起其損傷和數(shù)量的減少。但其具體機(jī)制目前仍然不甚清楚，因此，有必要對(duì)DN中足細(xì)胞凋亡所致的機(jī)制進(jìn)一步深入研究，為臨床預(yù)防和治療DN提供理論依據(jù)。
　　轉(zhuǎn)錄因子特異性蛋白-1(Sp1)屬于SP/KLF轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，之前的研究數(shù)據(jù)顯示:Sp1在人類包括甲狀腺、胰腺、肝細(xì)胞、結(jié)直腸

3、和胃癌各種腫瘤中高表達(dá)，這可能是腫瘤存在或發(fā)展的關(guān)鍵因素。最近，越來(lái)越多的證據(jù)表明Sp1與細(xì)胞凋亡有關(guān)，同時(shí)一些研究也證實(shí)Sp1還參與DN的發(fā)病機(jī)制。與此同時(shí)，有研究表明Sp1在維持足細(xì)胞完整性尤為重要，然而，HG是否激活Sp1在足細(xì)胞中的表達(dá)從而導(dǎo)致足細(xì)胞的凋亡還不清楚，本研究的目的是探討高葡萄糖是否激活體外培養(yǎng)足細(xì)胞Sp1的表達(dá)以及其在高糖誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡中的可能機(jī)制。
　　研究方法:
　　永生的小鼠足細(xì)胞在含有正常葡萄糖

4、(NG)、高糖(HG)或Sp1 siRNA培養(yǎng)基中培養(yǎng)，用實(shí)時(shí)PCR、免疫印跡和免疫熒光測(cè)定足細(xì)胞中Sp1的表達(dá)。在使用Sp1 siRNA下調(diào)Sp1表達(dá)的情況下，通過(guò)流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)Sp1在高糖誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡中的作用。使用實(shí)時(shí)PCR、免疫印跡方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡基因Bax的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS17.0，數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。多個(gè)組之間的比較使用單向方差分析與Bonferonni's/Turkey檢驗(yàn)或Dunnet

5、t's T3檢驗(yàn)。P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　在培養(yǎng)的足細(xì)胞中，高糖以時(shí)間和劑量依賴的方式刺激Sp1的表達(dá)。用Sp1siRNA預(yù)處理后(50nm)明顯降低Sp1的表達(dá);同時(shí)，高糖引起的細(xì)胞凋亡效應(yīng)也被明顯抑制。此外，我們還發(fā)現(xiàn)HG也增加了足細(xì)胞中Bax的表達(dá)，這一效應(yīng)同樣能被Sp1 siRNA所下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　Sp1/Bax信號(hào)通路在HG誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡中發(fā)揮作用，阻斷Sp1/Bax信號(hào)