RA誘導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為精原干細(xì)胞及Stra8啟動(dòng)子的研究.pdf

1、具廣泛的臨床調(diào)查顯示，不孕不育癥正困擾著13％的夫婦，越來(lái)越多的證據(jù)顯示，由于男性原因造成的不能生育正在不斷的增加，已經(jīng)達(dá)到了半數(shù)的比例。近年來(lái)的一些研究結(jié)果，讓人們看到了利用干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的方法治療男性不育的希望。視黃酸對(duì)維持正常的雄性睪丸結(jié)構(gòu)和功能起著重要的作用。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，在雄性生殖腺發(fā)育過(guò)程中有一組基因，它們可以被視黃酸特異性的誘導(dǎo)活化，稱(chēng)為Stra(Stimulated byRetinoic Acid)基因。從鼠源分離得到

2、的Stra 8基因編碼一種細(xì)胞質(zhì)蛋白，該基因只特異性的在成熟雄性生殖細(xì)胞中表達(dá)，其功能被認(rèn)為與精子形成有關(guān)。為研究Stra，8基因的表達(dá)特性，我們從小鼠的基因組中克隆了Stra8基因的啟動(dòng)子序列(1.4 kb)。將Stra8基因的1.4 kb啟動(dòng)子序列克隆到pEGFP-1載體的EGFP基因之前，構(gòu)建成由Stra8基因1.4kb啟動(dòng)子序列調(diào)控表達(dá)綠色熒光蛋白的pStra8-EGFP載體。將其分別轉(zhuǎn)化到不同類(lèi)型的細(xì)胞中，如小鼠ES-129細(xì)

3、胞、人胎兒胰腺干細(xì)胞、小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和小鼠精原干細(xì)胞等，通過(guò)熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，綠色熒光蛋白只在小鼠精原干細(xì)胞中表達(dá)，表明Stra8基因是組織特異性表達(dá)的基因。將pStra8-EGFP轉(zhuǎn)染小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)G418篩選2周后，用視黃酸誘導(dǎo)，12小時(shí)培養(yǎng)后，有一部分轉(zhuǎn)染pStra8-EGFP載體的細(xì)胞表達(dá)綠色熒光蛋白。RT-PCR證明這些細(xì)胞中有精原干細(xì)胞特異表達(dá)基因Stra8的轉(zhuǎn)錄，還有生殖細(xì)胞特異表達(dá)基因CyclinA2和