氧化鈹致大鼠肺纖維化的實驗研究.pdf

1、目的：
　　本研究以BeO為染毒物質，復制大鼠肺纖維化動物模型，通過檢測實驗動物染毒Thy-1、TGFβ-smad2/3信號通路蛋白的表達，探討Thy-1、TGFβ1-smad2/3信號通路在鈹致肺纖維化中的意義，為后續(xù)研究提供依據。
　　方法：
　　64只SPF級健康雄性SD大鼠，隨機分為陰性對照組（32只）、BeO染毒組（32只）。氧化鈹組氣管灌注BeO混懸液0.5ml，陰性對照組注入等量的無菌生理鹽水，處死時間為

2、染毒后20、40、60和80 d四個時間點取材，分別進行以下實驗：
　　1.取肺組織，制作石蠟切片并進行HE、Masso n和免疫組化染色，同時制作電鏡切片。
　　2.實時定量PCR（RT-PCR）法檢測COL-I，COL-III和α-SMA的基因表達水平。
　　3.蛋白質印跡法（western-blot）檢測各組肺組織中COL-I，CLOL-III和α-SMA的蛋白水平。
　　4.取肺組織制備肺組織勻漿，酶聯(lián)免

3、疫法（ELISA）檢測Thy-1、TGFβ1、smad2、smad3、p-smad2、p-smad3的蛋白表達。
　　結果：
　　1.鼠肺組織解剖學形態(tài)和病理學的改變：大體觀察結果顯示：陰性對照組肺呈粉紅色，光滑質軟。BeO染毒后，隨染毒時間延長肺部損傷進行性加重，逐漸出現充血、體積增大、局部白色粟粒狀結節(jié)等，最終可見全肺結節(jié)及萎縮等。HE染色顯示：BeO染毒后20、40d主要病理改變以炎性細胞浸潤為主，肺泡隔增厚；染毒后6

4、0、80 d肺泡腔縮小，部分肺泡結構消失和結構紊亂，局部可見纖維化結節(jié)且可見 BeO粉塵顆粒，局部發(fā)生肺組織實變。Masson染色顯示:BeO染毒后支氣管及肺泡間隔可見藍色膠原沉積隨著時間的延長藍色膠原沉積明顯增加。電鏡結果顯示：BeO染毒20d和40d后呈現肺泡Ⅱ型上皮細胞胞漿嗜鋨小體排空；60d和80d后肺泡Ⅱ型上皮細胞胞漿嗜鋨小體嗜鋨小體致密，肺間質可見纖維束存在。
　　2.BeO染毒組COL-I mRNA和蛋白表達升高（P

5、<0.05）；BeO染毒組COL-I mRNA和蛋白隨著時間延長而增加（P<0.05）。BeO染毒60、80 d COL-III mRNA和蛋白表達水平升高（P<0.05）；BeO染毒組COL-III mRNA和蛋白隨著時間延長而增加（P<0.05）。BeO染毒后a-SMAmRNA表達升高（P<0.05），BeO染毒組a-SMA蛋白表達高于同時間點的陰性對照組（P<0.05）；a-SMA mRNA隨著時間延長而增加（P<0.05）。

6、r>　　3.BeO染毒TGFβ1表達升高（P<0.05），TGFβ1隨著時間延長而增加（P<0.05）。BeO染毒后s mad2、s mad3蛋白水平升高（P<0.05），Smad3表達隨著時間延長而增加（P<0.05）；BeO染毒p-s mad2、p-smad3表達升高（P<0.05）并且隨著時間延長而增加。
　　4.BeO染毒后Thy-1表達降低，隨著時間延長而降低（P<0.05）。
　　結論：
　　（1）一次性非