新型多房棘球蚴亞單位疫苗CTB-Emy162的研究.pdf

1、目的：構(gòu)建融合基因 CTB-Emy162原核表達(dá)系統(tǒng)，純化得到融合蛋白。建立多房棘球蚴亞單位疫苗 CTB-Emy162的動(dòng)物模型，觀察亞單位疫苗 CTB-Emy162免疫原性和抗原性。
　　方法：根據(jù)多房棘球蚴抗原Emy162在GenBank中的序列，用OptimumTM Codon軟件優(yōu)化Emy162，從而獲得適合大腸桿菌BL-21表達(dá)的Emy162基因序列。PCR擴(kuò)增Emy162基因，利用分子生物學(xué)技術(shù)與免疫佐劑霍亂毒素B亞基

2、（CTB）相偶聯(lián)。設(shè)計(jì)出一個(gè)科學(xué)合理的亞單位疫苗 CTB-Emy162。構(gòu)建 CTB和 Emy162雙基因原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-CTB-Emy162，將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化于E.coli BL-21（DE3）中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá)后，利用Ni-NTA柱親和層析結(jié)合離子交換色譜法純化后獲得的蛋白。在獲得蛋白 CTB-Emy162基礎(chǔ)上，建立實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的動(dòng)物模型：將純化后的重組蛋白CTB-Emy162免疫SPF級(jí)BALB/c小鼠作為實(shí)驗(yàn)

3、組，PBS免疫作為對(duì)照組。采用脾淋巴細(xì)胞增殖、ELISA等方法確證重組蛋白CTB-Emy162的免疫原性和特異性。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建重組蛋白 CTB-Emy162的原核表達(dá)載體，并獲得純化后的重組蛋白CTB-Emy162。經(jīng)脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、ELISA等分子生物學(xué)和免疫學(xué)方法證實(shí)CTB-Emy162有良好的免疫原性和抗原活性。
　　結(jié)論：經(jīng)原核表達(dá)的多房棘球蚴亞單位疫苗 CTB-Emy162具有良好抗原性和免疫效果，有可