腸道菌產(chǎn)雌馬酚的制備及活性研究.pdf

1、以市售大豆異黃酮粉為底物，采用從素食者糞便中分離得到的腸道菌LG-Q2,即鶉雞腸球菌（Enterococcus.gallinarum）為工作菌，對發(fā)酵代謝產(chǎn)物雌馬酚進行制備與生物活性評價。采用單因素試驗、正交試驗、響應曲面法，在前期工作的基礎(chǔ)上，進一步考查了工作菌的生長曲線、不同碳源對雌馬酚轉(zhuǎn)化力的影響，并優(yōu)化促進雌馬酚轉(zhuǎn)化力的發(fā)酵條件。結(jié)果表明:生長規(guī)律為37℃厭氧條件下，培養(yǎng)6h后進入指數(shù)期、24 h后進入生長平穩(wěn)期、39 h后為衰

2、亡期，活菌數(shù)為1.34×108;葡萄糖為最適碳源，雌馬酚轉(zhuǎn)化能力最高為2.21μg/mg;最優(yōu)發(fā)酵條件:發(fā)酵液中葡萄糖濃度為5.00g/L，pH值7.02，NaCl濃度3.93g/L時，雌馬酚轉(zhuǎn)化力最大預測值2.59μg/mg，驗證試驗實際測得的雌馬酚轉(zhuǎn)化能力為2.58μg/mg，二者差異不顯著，證明響應模型成立，試驗得到的最優(yōu)條件結(jié)果可靠。
　　向培養(yǎng)基中分別加入不同梯度濃度的葡萄糖、麥芽糖、乳糖、木聚糖和蔗糖等不同碳源，確定最

3、佳碳源種類，結(jié)果顯示，當加入葡萄糖雌馬酚轉(zhuǎn)化力最高。以碳源、pH值和NaCl為單因素、雌馬酚轉(zhuǎn)化力為評價指標，通過響應曲面試驗考察不同因素對腸道菌LG-Q2產(chǎn)雌馬酚能力的影響，確定腸道菌LG-Q2代謝大豆異黃酮的最佳條件。結(jié)果是響應曲面試驗中當最佳條件為葡萄糖濃度5.00g/L，pH值7，NaCl濃度3.93g/L。
　　以發(fā)酵液為樣品，選用活性炭脫色、聚酰胺樹脂為吸附劑進行純化處理，經(jīng)冷凍干燥制備雌馬酚。采用單因素正交試驗考察脫

4、色時間、活性炭用量以及脫色溫度對脫色率的影響;優(yōu)化最佳脫色、純化條件，結(jié)果表明:對脫色率影響最大的因素為脫色時間，其次為脫色溫度、脫色劑量;當脫色溫度50℃，脫色劑量2g，脫色的時間1.5h為最佳條件。之后對脫色后的樣液進行雌馬酚純化，以（乙腈+甲醇+水）∶(3+4+3)洗脫劑用量、洗脫速率、聚酰胺樹脂吸附劑用量為單因素，雌馬酚含量為評價指標，經(jīng)正交試驗優(yōu)化純化條件，結(jié)果表明:洗脫劑用量對雌馬酚濃度影響結(jié)果最大，其次為吸附劑量和洗脫速率

5、;洗脫劑用量40mL，洗脫速率0.6mL/min，吸附劑用量2g。采用優(yōu)化的條件參數(shù)及液相色譜法，發(fā)酵液雌馬酚轉(zhuǎn)化率為0.25％，相同方法做回收試驗，回收率為78.38％，樣品純度為38％。
　　灌胃方式對試驗小鼠分別喂入，以雌馬酚樣品、雌馬酚標品、大豆異黃酮保健品為受試物，設(shè)計不同試驗組，徑口灌胃給雌雄小鼠，試驗45天，每隔15天對小鼠眼眶處進行取血后離心得血清，用試劑盒法測定小鼠血清中游離脂肪酸、高、低密度脂蛋白膽固醇、總蛋白