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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.探討三氧化二砷對(duì)MRL/lpr狼瘡鼠脾臟淋巴細(xì)胞組蛋白H3乙?;降挠绊?。
2.探討三氧化二砷對(duì)組蛋白乙?;D(zhuǎn)移酶(HATs)和組蛋白去乙?;?HDACs)活性的影響。
方法:
1.小鼠脾臟淋巴細(xì)胞培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)分組
將20周齡MRL/lpr狼瘡鼠和正常C57BL/6J小鼠無菌條件下取出脾臟,制配成脾臟淋巴細(xì)胞懸液。體外經(jīng)PHA-p(20μg/ml)和IL
2、-2(1000IU/ml)常規(guī)刺激48h后,隨機(jī)分為3組:(1)ATO組;(2)曲古抑菌素(TrichostatinA,TSA)組;(3)RPMI1640組,繼續(xù)培養(yǎng)24h。
2.組蛋白提取與Western印跡分析
采用酸抽提法提取組蛋白。Western印跡法檢測(cè)乙?;M蛋白H3的表達(dá)量。
3.核蛋白提取與HAT和HDAC活性測(cè)定
提取小鼠脾臟淋巴細(xì)胞核蛋白。比色分析組蛋白去乙?;?/p>
3、酶活性試劑盒測(cè)定脾臟淋巴細(xì)胞核蛋白HDAC活性。比色分析組蛋白乙酰化轉(zhuǎn)移酶活性試劑盒測(cè)定脾臟淋巴細(xì)胞核蛋白HAT活性。
結(jié)果:
1.MRL/lpr狼瘡鼠中RPMI1640組、ATO組、TSA組組蛋白H3乙酰化水平分別為0.46±0.06、0.87±0.02、1.6±0.13(n=3),且差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);
2.MRL/lpr狼瘡鼠中RPMI1640組、ATO組、TSA組H
4、DAC活性分別為(23.73±5.28)μmol/L、(14.47±2.89)μmol/L、(11.83±2.10)μmol/L,表明ATO和TSA能明顯降低HDAC活性,P值分別為0.001、0.000(n=6);
3.MRL/lpr狼瘡鼠中RPMI1640組、ATO組、TSA組HAT活性分別為(1.34±0.49)μmol/L、(1.38±0.60)μmol/L、(1.24±0.35)μmol/L,三組間兩兩相比差異無
5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,以上分別為P>0.05(n=6);
4.以C57BL/6J空白對(duì)照組(RPMI1640)HDAC/HAT的比值作為樣品校正,其值設(shè)置為100%(100%±26%)。則MRL/lpr狼瘡鼠RPMI1640組、ATO組、TSA組HDAC/HAT的比值分別為444%±81%、282%±101%、240%±66%。ATO組與TSA組HDAC/HAT的比值均低于RPMI1640組,P分別為0.004和0.001(n=6)
6、:
5.C57BL/6J小鼠中,ATO組和RPMI1640組之間以上指標(biāo)均無差異(組蛋白乙酰化水平:依次為0.71±0.09、0.75±0.04,P=0.489;HDAC:(16.55±3.68)μmol/L、(17.72±3.92)μmol/L,P=0.550;HAT:(4.29±0.99)μmol/L、(4.36.±1.00)μmol/L,P=0.931;HDAC/HAT:94%±23%、100%±26%,P=0.56
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