鹽酸川芎嗪肺靶向微粒制劑的制備及其細(xì)胞毒性考察.pdf

1、目的:本研究以鹽酸川芎嗪（ligustrazine hydrochloride，LTH）為抗腫瘤模型藥，先將其制成脂質(zhì)體(liposome，LP)，進(jìn)行處方、工藝考察;再將脂質(zhì)體包入微囊(microcapsules，MC)，制備成載藥脂質(zhì)體微囊(liposome-in-microcapsules，LIM)。以人肝癌細(xì)胞（HepG2）和人臍靜脈細(xì)胞（HUVECs）為細(xì)胞模型，考察鹽酸川芎嗪脂質(zhì)體對兩種細(xì)胞株的細(xì)胞毒性。
　　方法:<

2、br>　　1.鹽酸川芎嗪脂質(zhì)體(LTH-LP)的制備及其理化性質(zhì)考察采用硫酸銨梯度法制備LTP-LP，以包封率為指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化處方、工藝條件;并用透析法測定包封率，激光粒度及Zeta電位分析儀測粒徑和電位，采用體外透析釋放實(shí)驗(yàn)考察LTH-LP的體外釋放性等理化性質(zhì)，以包封率為指標(biāo)測定不同存儲條件下LTP-LP的穩(wěn)定性。
　　2.鹽酸川芎嗪脂質(zhì)體細(xì)胞毒性考察采用MTT法考察LTH-LP混懸液、B-LP混懸液和

3、LTH溶液對人肝癌HepG2細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮HUVECs細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　3.鹽酸川芎嗪載脂質(zhì)體微囊(LTH-LIM)的制備及其理化性質(zhì)考察采用乳化交聯(lián)法制備LTH-LIM，以載藥量和包封率為篩選指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)法研究殼聚糖溶液濃度、殼聚糖溶液與LTH-LP混懸液體積比、乳化劑比例和乳化劑濃度、固化劑比例等因素對LTH-LIM的載藥量和包封率的影響。采用掃描電鏡、DSC對其進(jìn)行表征;采用體外透析釋放實(shí)驗(yàn)考察LTH-L

4、IM的體外釋性。
　　結(jié)果:
　　1.鹽酸川芎嗪脂質(zhì)體的制備及其理化性質(zhì)考察采用優(yōu)化后的硫酸銨梯度法制備LTH-LP，通過單因素法和正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)篩選出最佳處方:大豆磷脂:膽固醇為2∶1，十八胺2.00 mg，45℃減壓旋蒸為均勻薄膜;硫酸銨溶液濃度為200 mmol·L-1，孵化溫度60℃。通過理化性質(zhì)表征測得平均包封率最高可達(dá)82.4％，平均粒徑為173.4 nm，Zeta電位為11.5 mV;透射電鏡觀察，LTH-LP外

5、觀圓整，粒徑分布較均勻;體外溶出實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:LTH-LP中的LTH藥物釋放減慢且較完全，具有一定的緩釋效果。LTH-LP在4℃充氮?dú)鈼l件下較穩(wěn)定。
　　2.鹽酸川芎嗪脂質(zhì)體細(xì)胞毒性考察細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在處理時間48 h后，LTP-LP對人臍靜脈內(nèi)皮HUVECs的細(xì)胞抑制作用強(qiáng)于人肝癌HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用(p＜0.05)。
　　3.鹽酸川芎嗪載脂質(zhì)體微囊的制備及其理化性質(zhì)考察 LTH-LIM制備方法為殼聚糖乳化

6、-交聯(lián)法。最佳處方為:二甲基硅油為油相;乳化劑吐溫-80和司盤-80比例為1∶1;殼聚糖冰乙酸溶液濃度為2％;固化劑25％的戊二醛用量為0.6％;水相組成比例為殼聚糖冰乙酸溶液與脂質(zhì)體混懸液比例為1∶1。測得LTH-LIM的載藥量在2.925％～3.702％之間，包封率為45％～60％之間，各因素對載藥量影響較大。LTH-LP外觀圓整，粒徑分布均勻，多分布于4～8μm; DSC差熱掃描結(jié)果顯示，LTH-LP包被入微囊中;體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果