亞麻殼培養(yǎng)基質(zhì)中木酚素類物質(zhì)的分離鑒定及生物活性研究.pdf

1、木酚素是由肉桂醇發(fā)生二聚反應(yīng)生成的大分子化合物，其基本結(jié)構(gòu)是苯丙氨酸。亞麻木酚素是一種提取于亞麻中的多酚類物質(zhì)，在已知的植物當(dāng)中亞麻是含有木酚素最多的植物。研究發(fā)現(xiàn)，木酚素可以通過與多種酶類物質(zhì)的綜合作用抑制人體內(nèi)卵巢素的合成，通過這種抑制作用可以降低婦女患乳腺癌等婦科疾病發(fā)生的機率。另外，木酚素也因為其具有的抗癌、抗真菌以及清除體內(nèi)自由基等諸多作用受到越來越多科學(xué)家的關(guān)注。
　　本研究以亞麻殼基質(zhì)中木酚素類物質(zhì)為研究對象，用亞麻

2、殼代替金針菇培養(yǎng)過程中使用的棉籽殼和木屑培養(yǎng)金針菇菌種。金針菇菌種在生長階段會對亞麻殼進行分解利用。通過調(diào)節(jié)亞麻殼和其他原輔料不同的物料比，既能使金針菇正常生長，長出完整的金針菇菌絲和白色金針菇，又能使得亞麻殼的分解利用率達到最大。對降解利用后的亞麻殼，使用80％的甲醇進行醇提，并采用RP-HPLC/UV和UPLC/MS/MS兩種分析方法對亞麻殼基質(zhì)中的木酚素類物質(zhì)進行分離、鑒定以及定量分析。同時，分別采用DPPH抗氧化、α-葡萄糖苷酶

3、抑制劑以及牛津杯方法分別測定亞麻殼基質(zhì)中木酚素類物質(zhì)的抗氧化、降血糖以及抑菌活性，為進一步研究亞麻木酚素的體內(nèi)活性實驗或者動物性模型實驗提供基本的生物數(shù)據(jù)。最后，研究不同時間段內(nèi)金針菇菌種對亞麻殼木質(zhì)素的生物降解過程，通過測定不同時間段內(nèi)亞麻殼基質(zhì)中木酚素類物質(zhì)的含量以及活性的變化，期望能夠?qū)⒛痉铀馗魑镔|(zhì)的含量變化趨勢作為一種木質(zhì)素生物降解程度的推斷新標(biāo)準(zhǔn)。
　　本文第一部分，首先利用亞麻殼代替棉籽殼和木屑培養(yǎng)金針菇，通過調(diào)節(jié)不同

4、的物料比，最終得到最適合金針菇生長以及產(chǎn)生木酚素種類和含量最多的物料比例:亞麻殼15％、麩皮5％、葡萄糖5％、KH2PO40.1％、MgSO40.05％、CaCO30.2％以及水74.65％。用80％的甲醇進行提取，采用HPLC和UPLC-MS分析方法進行分離鑒定，總共分離鑒定出7種不同的木酚素單體產(chǎn)物，分別為:異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷、烏臺樹脂酚、松脂醇、松脂醇二葡萄糖苷、阿魏酸苷以及對香豆酸苷、開環(huán)異落葉松樹脂酚;在UPLC/MS/

5、MS的二級質(zhì)譜圖中，七種物質(zhì)的二級質(zhì)譜圖呈現(xiàn)的十分清晰;采用相對定量的方法分別對七種物質(zhì)的含量進行測定，分別為:FeAG16.521mg/g、PINO16.485mg/g、SECO8.387mg/g、MATA15.930mg/g、 CouAG6.21mg/g、 SDG12.874mg/g、Pinoresinol diglucoside5.101 mg/g;同時利用福林酚試劑法測定亞麻殼基質(zhì)中木酚素類物質(zhì)的總酚含量，測的總酚含量達到617

6、.5mgGAE/g。
　　第二部分，主要研究了亞麻殼基質(zhì)中木酚素類物質(zhì)的體外生物活性。采用DPPH法、α-葡萄糖苷酶抑制劑法以及牛津杯法分別測定亞麻殼基質(zhì)中木酚素類物質(zhì)的抗氧化、降血糖以及抑菌活性，并比較了亞麻殼基質(zhì)中木酚素類物質(zhì)和其他處理方式得到的木酚素產(chǎn)物的體外生物活性。采用α-葡萄糖苷酶、DPPH抗氧化以及牛津杯法三個實驗對亞麻殼基質(zhì)中木酚素類物質(zhì)的體外生物活性進行測定，實驗結(jié)果表明亞麻殼培養(yǎng)金針菇后具有良好的降血糖、抗氧化

7、以及對大腸桿菌的抑菌作用。本次實驗測得亞麻殼基質(zhì)中木酚素的抗氧化和降血糖的IC50分別為3.41±0.31μg/mL和4.14±0.55μg/mL。
　　本文第三部分，主要研究了金針菇在不同的生長階段對亞麻殼的生物降解過程以及不同時間段內(nèi)亞麻殼基質(zhì)中木酚素類物質(zhì)含量和生物活性的變化。通過為金針菇菌絲的生長提供適宜的碳源和氮源物質(zhì)以及良好的環(huán)境條件，有利于金針菇的正常生長，且能夠在生長過程中釋放出酸堿產(chǎn)物以及酶類物質(zhì)作用于亞麻殼，將

8、亞麻殼進行有效的生物降解，分解亞麻殼細胞壁完整結(jié)構(gòu)，使得木素原本致密結(jié)構(gòu)被破壞，木酚素等活性成分能夠從木素中被釋放出來，并將游離的木酚素大分子聚合物進行解聚形成木酚素類物質(zhì)的單體化合物;同時分別測定了亞麻殼基質(zhì)中各種物質(zhì)的含量變化趨勢并且利用DPPH抗氧化法和α-葡萄糖苷酶抑制劑法研究不同生長時期亞麻殼基質(zhì)中木酚素類物質(zhì)的抗氧化和降血糖抑制率的變化趨勢，為木質(zhì)素的生物降解途徑提供了合適的微生物來源，期望能夠?qū)⒛痉铀卦谏锝到膺^程當(dāng)中的含