一氧化碳中毒小鼠腦內Ang-1、Ang-2及Tie-2mRNA的動態(tài)變化及丁苯肽對其影響.pdf

1、背景：一氧化碳(Carbon monoxide，CO)是一種無色、無味、無臭、無刺激性的有毒氣體，是生活和生產中造成中毒性死亡最常見的窒息性氣體。它可以引起機體多個系統損傷，其中大腦損害最為嚴重，且有一部分急性一氧化碳中毒患者在中毒癥狀緩解、意識恢復正常后，大約經歷2到60天表現正?；蚧菊５拈g歇期后，會再次出現一系列腦病的癥狀，稱為一氧化碳中毒遲發(fā)性腦病(Delayed encephalopathy after carbon mon

2、oxide poisoning，DEACMP)。其主要表現為記憶受損、意識障礙、錐體外系神經障礙、錐體系神經損害等，是CO中毒最嚴重的類型。有關急性CO中毒和DEACMP發(fā)病機制仍不十分清楚，迄今為止已經提出了許多假說，如缺血缺氧、細胞毒性損傷、再灌注損傷和自由基的形成、興奮性氨基酸的生成、凋亡機制等。其中缺血缺氧機制在CO中毒腦損傷的發(fā)生機理中占有重要地位。近年來，許多研究結果表明，缺血缺氧后，缺血周圍區(qū)域存在新生血管形成現象，而通過

3、血管新生可以啟動損傷區(qū)微血管網重建，進而可以改善損傷區(qū)微循環(huán)組織的血液灌流，這對CO中毒后缺血缺氧神經元的存活具有重要意義。目前，動物實驗已證實，腦缺血時腦內可見新生血管形成，而CO中毒后腦血管的分子生理病理變化尚無明確報道。
　　 在新生血管生成過程中，血管生成素(Angiopoiten，Ang)家族發(fā)揮著重要作用，它可以特異作用于血管內皮細胞。其中家族中的Ang-1、Ang-2與血管生成密切相關，與內皮細胞表面特異受體Tie

4、-2酪氨酸激酶結合發(fā)揮促血管生成作用。Ang/Tie-2系統參與血管新生的最后階段，通過干預內皮細胞、平滑肌細胞和周細胞的相互作用促進血管生成和重塑，在缺血等病理狀態(tài)下可作為一種關鍵的血管生成調節(jié)劑。然而CO中毒后腦組織內Ang-1、Ang-2及Tie-2的表達變化無相關報道。
　　 丁苯肽是臨床應用于治療急性腦卒中的一類化學新藥，可促進新生血管生成，恢復腦血流的供應，增加缺血區(qū)腦血流量和改善腦缺血區(qū)微循環(huán)，保護線粒體功能，改善

5、全腦缺血后的能量代謝等，涉及腦缺血病理的多個環(huán)節(jié)，但其對治療和改善急性CO中毒損傷的分子機制尚不很明確。
　　 目的：本實驗擬在建立CO中毒小鼠模型的基礎上，從mRNA水平動態(tài)觀察小鼠海馬區(qū)Ang-1、Ang-2及Tie-2表達的變化規(guī)律，探討CO中毒對小鼠腦內血管內皮系統的影響，以期能夠推測新血管形成機制在腦損傷發(fā)生后的作用，并進一步在分子水平研究CO中毒后丁苯肽對血管生成素系統的影響。
　　 實驗方法：健康雄性小鼠1

6、44只，體重(18-22)g，隨機分成空氣對照組（48只），染毒(CO)組（48只），丁苯肽組（48只），各組再分為6h、1d、2d、3d、4d、7d、14d、21d、28d，8個亞組。染毒組按照單次腹腔注射法建立CO中毒小鼠模型，空氣對照組以等量空氣腹腔注射，染毒后丁苯肽組給予丁苯肽(1ml/kg，bid)腹腔注射。相應時間點，處死小鼠，斷頭取腦，研磨腦組織，提總RNA。采用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術檢測各組Ang-1、

7、Ang-2及Tie-2 mRNA水平表達變化。數據以均數±標準差表示，統計學處理采用SPSS16.0軟件進行One-WayANOVA檢驗。
　　 結果：
　　 1、CO中毒后，Ang-1、Ang-2和Tie-2 mRNA表達呈雙峰性增高。結果顯示：與空氣對照組相比，CO中毒后，Ang-1、Ang-2和Tie-2 mRNA表達隨時間增加（P＜0.05），3d后達到第一個高峰（P＜0.05），4d后Ang-1、Ang-2和T

8、ie-2 mRNA表達下降，并于7d后，Ang-1、Ang-2和Tie-2 mRNA表達達到第二個高峰(P＜0.05)，28d后表達水平恢復正常水平。小鼠腦部海馬區(qū)的Ang/Tie-2系統在CO中毒后表達呈規(guī)律性變化。
　　 2、小鼠CO中毒后使用丁苯肽治療，Ang-1、Ang-2和Tie-2 mRNA表達呈單峰性增高。與CO組相比，使用丁苯肽后，Ang-1、Ang-2和Tie-2mRNA表達未表現雙峰性增高，在6h后即出現表達

9、增高（P＜0.05），之后逐步增高于3d達到高峰。3d時，丁苯肽組Ang-1 mRNA表達量低于CO組（P＜0.05）；Ang-2和Tie-2 mRNA表達量高于CO組（P＜0.05）。3d后表達水平逐步下降，于28天恢復正常水平，沒有出現CO組的7d高峰。
　　 3、各組間Ang-2/Ang-1比值的變化結果顯示，空氣對照組Ang-2/Ang-1的比值在6h～28天內保持比較低的水平，比值恒定(0.36±0.03);CO組的A

10、ng-2/Ang-1比值在6h即升高達到高峰(與空氣對照組相比，P＜0.05)，2d到達低谷，隨后比值緩慢上升于7d達到第二個高峰(與空氣對照組相比，P＜0.05)，14天時即恢復正常水平；丁苯肽組的Ang-2/Ang-1比值也在6h即升高達到高峰（與CO組相比，P＜0.05），1d～2d時達到低谷，隨后比值上升于4d～7d達到高峰(與CO組相比，P＜0.05)，28天時才恢復正常水平。
　　 結論：
　　 1、CO中毒