普通針毛蕨總黃酮抗腫瘤作用及其藥代動力學初步研究.pdf

1、普通針毛蕨Macrothelypteris torresiana (Gaud.) Ching廣泛分布于長江流域以南各省，資源十分豐富。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)由該植物提取制備的總黃酮類成分部位具有良好的抗腫瘤作用，其中主要化合物原芹菜素的含量占總黃酮提取物的重量百分比達45％以上。為了進一步探討普通針毛蕨總黃酮抗腫瘤作用及其成藥性，本課題圍繞普通針毛蕨總黃酮有效部位進行了普通針毛蕨藥材及其總黃酮提取物的質量評價研究；探討了普通針毛蕨總黃酮提

2、取物羥丙基β-環(huán)糊精包合工藝；對普通針毛蕨總黃酮包合劑與CMC-Na混懸劑平行對比進行了急性毒性、亞急性毒性、體內抗腫瘤及藥代動力學等一系列探索性研究。
　　 參照《中國藥典》2005年版一部附錄IX K所載灰分測定法、IX H所載水分測定法對10批干燥至恒重的普通針毛蕨細粉的總灰分、酸不溶性灰分及水分進行測定。以前期化學研究獲得該藥材的標志成分原芹菜素為對照，參照《中國藥典》2005年版一部附錄VA所載紫外-可見分光光度法檢測

3、樣品中總黃酮的含量，HPLC法測定樣品總提取物中原芹菜素含量，結果顯示：生藥材中總灰分不得超過8.31％，酸不溶性灰分不得超過3.90％，水分不得超過15.01％，t檢驗顯示，上述指標，因產地不同，無顯著性差異(p>0.05)；生藥材中總黃酮成分不得低于3.31％，原芹菜素的含量不得低于0.84％；黃酮總提取物中原芹菜素含量不得低于37.06％。T檢驗顯示，普通針毛蕨生藥材中，因產地不同，總黃酮及原芹菜素含量有一定的差異(0.01

4、0.05)。
　　 應用經典藥理學研究方法對普通針毛蕨總黃酮提取物混懸劑與包合劑進行了急性毒性評價實驗，按體重最高劑量6.67、2.14 g kg-1、以0.75組間距為稀釋等級系數(shù)，共設8個劑量組，一次性小鼠灌胃給藥，觀察7天，Bliss法計算結果得出其LD50分別為2.7555、0.8707 g kg-1；亞急性毒性混懸劑按600、60、6 mg kg-1，包合劑按400、40、4 mg kg-1體重給藥，每日一次，連續(xù)灌胃

5、給藥14天，結果所有樣品組的臟器系數(shù)、尿素氮、轉氨酶與陰性對照組比較無顯著性差異(p>0.05)，但臟器HE染色切片結果顯示高劑量組有輕微肝細胞顆粒變性，其它臟器未見損傷，兩種劑型間無顯著性差異。
　　 體內抗腫瘤試驗采用移植腫瘤S180荷瘤小鼠，以普通針毛蕨總黃酮水溶液和混懸劑均按體重60、30、15 mg kg-1灌胃給藥、包合劑按體重40、20、10mg kg-1灌胃給藥，陽性對照組均為五氟尿嘧啶20mg kg-1、陰性對

6、照組均為生理鹽水等容量給藥。每日2次，連用10天，結果顯示水溶液抑瘤率較低(<33.14)，而混懸劑(35.23-56.35％)、包合劑(25.45-54.57％)抑瘤率明顯提高；后兩者在本組內高、中劑量組間比較無顯著性差異(p>0.05)，低劑量組與高、中劑量組間有顯著性差異(p<0.05)。與陽性對照組比較，包合劑和混懸劑的高、中劑量組無顯著性差異(p>0.05)，水溶液各劑量組有顯著性差異(p<0.05)。
　　 藥代動力

7、學研究以普通針毛蕨總黃酮混懸劑與包合物二種劑型均按體重100、200、300mg kg-1，大鼠灌胃給藥。采用Das 2.0、二室模型(two compartment model)和統(tǒng)計矩法(noncompartment model)進行分析，兩者在大鼠體內均表現(xiàn)出明顯的線性動力學特征，AUC與劑量成正比、消除半衰期與劑量無關，動力學過程基本一致。但是包合物延長了半衰期、縮短了達峰時間，峰濃度有所提高。總黃酮中原芹菜素在肝、腎、肺、脾、

8、心等血流充沛的器官中分布較多，乳房、卵巢、子宮組織中有一定分布，腦、肌肉、脂肪分布較少。膽汁、尿液、糞便均有原芹菜素原型物排泄，且尿液>糞便>膽汁。包合物的糞便排泄量明顯減少，說明胃腸吸收明顯提高。血液、臟器組織中普遍存在一個新的代謝產物，由何而來？為何物？尚待進一步深入研究。
　　 應用平衡透析法進行了普通針毛蕨主要黃酮化合物原芹菜素的血漿蛋白結合率研究，結果顯示原芹菜素人血藥透析袋內外平衡時間約為10h，在低、中、高(200

9、、500、1000μg L-1)濃度下，其血漿蛋白結合率為90.5±1.2％、89.6±1.7％、91.4±1.4％；鼠血藥透析袋內外平衡時間約為6 h，在低、中、高(200、500、1000μg L-1)濃度下，鼠血漿蛋白結合率為80.7±2.2％、81.1±1.8％、81.9±1.3％。T檢驗說明原芹菜素在人、鼠血漿蛋白結合率之間有顯著差異(p<0.01)，但同一樣品低、中、高濃度之間，蛋白結合率無顯著性差異(p>0.05)。說明原