膽酸-喜樹堿偶聯(lián)物A2的抗腫瘤活性及藥代動力學研究.pdf

1、喜樹堿類抗腫瘤藥廣泛用于癌癥化療，作用靶點為靶向DNA復(fù)制過程中的TopoisomeraseⅠ(TopoⅠ)。但是，由于喜樹堿(CPT)的分子結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致了喜樹堿化學結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，水溶性差，血漿蛋白結(jié)合率低，口服生物利用度低，不可預(yù)測的毒性，這些因素都限制了喜樹堿化合物及其衍生物的使用。
　　膽酸是藥物的一種載體，通過肝腸循環(huán)可以攜帶藥物在體內(nèi)運輸。通過化學手段將藥物與膽酸相連，使藥物和膽酸不斷的經(jīng)歷肝腸循環(huán)，并使藥物在腸中和肝中不斷

2、富集，降低其他器官中藥物的濃度，對治療肝腸疾病有著重要的作用。同時，膽酸是內(nèi)源性物質(zhì)，與傳統(tǒng)的外源性載體相比，具有良好的生物兼容性。因此，以膽酸為載體，可以實現(xiàn)藥物的肝腸靶向性，減少毒副作用，提高藥物的藥效和生物利用度。
　　本論文針對課題組前期合成的膽酸-喜樹堿偶合物A2:10-(3'α，12'α-二羥基-5'β-膽烷酸-24'-羧基)-(20s)-喜樹堿，開展其生物活性及靶向性評價工作，包括在體內(nèi)和體外的毒性，活性，以及體內(nèi)的

3、生物利用度，藥代動力學和組織分布進行深入的研究。研究結(jié)果如下:
　　通過酯化反應(yīng)，將脫氧膽酸與羥基喜樹堿上的10位羥基連接，合成化合物A2，利用紅外光譜，核磁氫譜及質(zhì)譜鑒定的A2的化學結(jié)構(gòu)，利用液相紫外檢測藥物A2的純度達到99％以上。
　　利用MTT法考察A2體外抗腫瘤活性。A2對人結(jié)腸癌細胞HCT-116有明顯的增殖抑制作用，其IC50與CPT相當。同時，在0.0032μM到0.08μM范圍內(nèi)，A2對人正常肝細胞HL-7

4、702沒有明顯的細胞毒作用，而CPT的對人正常細胞的毒性作用很大。與CPT相比，A2有同樣的抑制腫瘤細胞增殖的效果和更低的毒性。在SMMC-7721細胞吸收實驗轉(zhuǎn)運A2進入細胞的中，證明A2通過主動運輸和被動擴撒兩種方式進入細胞，有機陰離子轉(zhuǎn)運肽OATP作為A2轉(zhuǎn)運蛋白之一參與A2的跨膜主動運輸，說明膽酸作為藥物載體在挾帶藥物進入細胞的過程中發(fā)揮著重要的作用。
　　利用體內(nèi)最大耐受量急性毒性試驗考察A2毒性，實驗結(jié)果顯示A2在小鼠

5、體內(nèi)的毒性遠低于CPT的毒性;在體內(nèi)抑瘤活性實驗結(jié)果中，CPT的抑瘤率分別為74.7％，74.1％，73.8％， A2的抑瘤率為82.9％，58.4％，58.2％。A2高劑量組的抑瘤率高于CPT高劑量組，盡管給藥劑量不同，由于A2的低毒性可以通過提高給藥濃度，來達到較好的抑瘤效果。
　　建立了快速簡單的高效液相色譜-質(zhì)譜（liquid chromatography tandem massspectrometry，LC-MS/MS）

6、方法測定A2在生物樣品中的含量。該分析方法的特異性，線性，精密度和準確度，基質(zhì)效應(yīng)和萃取回收率以及穩(wěn)定性均滿足體內(nèi)藥物代謝動力學及生物樣品分析的要求。
　　藥物代謝動力學表明，單次口服給藥50 mg/kg后，A2與CPT相比，在體內(nèi)的吸收過程較慢，并且A2的口服生物利用度為CPT的2倍。組織分布研究表明，A2在腸中富集最多，其次分別為脾＞肺＞肝＞心＞腎＞血。A2的吸收代謝部位主要在腸和肝中進行，A2在血液豐富的器官中分布較少，該藥