喜樹(shù)堿新衍生物CPT13體內(nèi)組織分布和藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、為了提高喜樹(shù)堿衍生物水溶性,降低毒性,增強(qiáng)其抗腫瘤活性及在血漿中的穩(wěn)定性,采用了含氮雜環(huán)化合物對(duì)10羥基喜樹(shù)堿的10位進(jìn)行親核取代反應(yīng)合成的一系列含氮化合物。本課題組對(duì)前期實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了細(xì)致的研究,篩選出喜樹(shù)堿-10(S)-O乙基吡唑(CPT13)體外作用效果最顯著。在初步研究其體外抗腫瘤活性中,CPT13對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ活性產(chǎn)生很強(qiáng)的抑制作用,這是其抗腫瘤活性機(jī)制之一,其還可以抑制人前列腺癌細(xì)胞(PC3)、人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT8)、人乳腺癌

2、細(xì)胞(MCF7)、人肺腺癌細(xì)胞(A549)的細(xì)胞生長(zhǎng),在0.008至25μM的范圍內(nèi)具有明顯的時(shí)間和劑量依賴性。在四種腫瘤細(xì)胞中,CPT13對(duì)HCT8細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng)。同時(shí)還研究了CPT13誘導(dǎo)HCT8腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制,即CPT13誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡主要通過(guò)影響細(xì)胞周期,激活線粒體凋亡途徑以及調(diào)節(jié)一些相關(guān)凋亡蛋白的表達(dá)如Bcl-2、Bax、p53蛋白水平的變化。本論文主要對(duì)喜樹(shù)堿衍生物CPT13體內(nèi)組織分布和藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行深入探討

3、,運(yùn)用高效液相色譜法和高效液相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析CPT13在動(dòng)物體內(nèi)的變化。研究結(jié)果如下:
　　 1.本文首次建立了高效液相色譜-質(zhì)譜(1iquid chromatography tandem massspectrometry,LC-MS/MS)測(cè)定動(dòng)物體內(nèi)CPT13的分析方法,即標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍是1-1000 ng/mL內(nèi),曲線的相關(guān)系數(shù)為0.9998,LLOQ為1 ng/mL,日間和日內(nèi)精密度分別低于2.58％和6.28％,同

4、時(shí)精確度變化范圍是97.34-110.67％,CPT13在不同的存儲(chǔ)條件下均穩(wěn)定。
　　 2.藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果表明單劑量口服分別給藥50 mg/kg,30 mg/kg和10 mg/kg,血漿中藥物濃度具有一定的劑量依賴性,AUC0-t和AUC0-∞也同樣具有劑量依賴性。同時(shí),口服給藥后,CPT13在體內(nèi)的t1/2近似0.67 h,直到480 min的時(shí)候仍能檢測(cè)到藥物濃度。靜脈給藥0.1 mg/kg,藥物在體內(nèi)快速經(jīng)過(guò)Ⅰ項(xiàng)代謝,給

5、藥2 h后,藥物在血漿中的濃度接近LLOQ值。通過(guò)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算,CPT13在大鼠體內(nèi)的絕對(duì)生物利用度近似3％。
　　 3.同時(shí)建立了用HPLC法檢測(cè)小鼠靜脈給藥后CPT13在各組織中的濃度變化,分析方法的特異性、線性、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度、回收率和穩(wěn)定性均良好。靜脈給藥后,藥物在肺,肝臟和腎臟中的濃度最高,其次是脾和心,最少的是胃和小腸。胃在給藥5 min時(shí)檢測(cè)到的濃度接近最低檢測(cè)線,以后的時(shí)間點(diǎn)均沒(méi)有檢測(cè)到藥物濃度,

6、小腸、心和脾在給藥60 min時(shí)候達(dá)到最低值,而肺、肝臟和腎臟在480 min時(shí)仍能檢測(cè)到藥物濃度。通過(guò)計(jì)算得到CPT13在不同組織中的AUC值,可以明顯的看出肺、肝臟和腎臟的AUC值遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他組織。
　　 本文通過(guò)動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn),得出了一系列口服和靜脈給藥后CPT13在動(dòng)物體內(nèi)藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù),同時(shí)直觀的考察了靜脈給藥后,CPT13在不同組織中的藥物含量變化。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果為CPT13進(jìn)一步研究及開(kāi)發(fā)為新藥提供很好的依據(jù),并為