羥基喜樹(shù)堿對(duì)PDGF刺激的大鼠肝星狀細(xì)胞膠原基因表達(dá)及ERK信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的:觀察羥基喜樹(shù)堿(HCPT)對(duì)血小板衍生因子(PDGF)刺激的大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC)a-SMA及Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)的影響,并探討HCPT調(diào)控HSC細(xì)胞a-SMA及Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)與ERK1/2信號(hào)通路之間的關(guān)系,為HCPT的抗肝纖維化臨床運(yùn)用奠定堅(jiān)實(shí)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:將大鼠肝星狀細(xì)胞株(HSC-T6)用含10％小牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng),血清饑餓法同步化24小時(shí)后,分為4組,分別是:空白對(duì)照組(

2、含0.4％小牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液)；PDGF(10ng/ml)刺激組；PD98059+PDGF組(30μmol/L PD98059+10ng/mlPDGF)；HCPT+PDGF組:(0.5mg/LHCPT+10ng/mlPDGF);在培養(yǎng)15分鐘、30分鐘、60分鐘后用western blot方法檢測(cè)ERK信號(hào)通路中ERK1/2蛋白磷酸化的表達(dá)情況；在培養(yǎng)12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)后,應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽法(MTT法)檢測(cè)HCP

3、T對(duì)PDGF刺激的HSC-T6細(xì)胞增殖的影響；RT-PCR半定量檢測(cè)HCPT對(duì)PDGF刺激的HSC-T6細(xì)胞a-SMA及Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:1、MTT法顯示12 h、24 h、48 h,PDGF組HSC-T6細(xì)胞增殖明顯；HCPT及ERK1/2阻斷劑PD98059組,HSC-T6細(xì)胞增殖減少,與空白對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與作用時(shí)間呈正比；2、RT-PCR結(jié)果顯示12h、24h、48h

4、,PDGF作用的HSC-T6細(xì)胞α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)明顯高于空白對(duì)照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與作用時(shí)間呈正比；HCPT和PD98059作用培養(yǎng)的HSC-T6細(xì)胞α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)明顯低于空白對(duì)照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與作用時(shí)間呈正比；而HCPT與PD98059兩組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);3、western blot結(jié)果顯示15min、30min、60min,PDG

5、F作用的HSC-T6細(xì)胞ERK1/2蛋白磷酸化表達(dá)增強(qiáng),在30分鐘時(shí)達(dá)到高峰,與空白對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；HCPT和PD98059作用的HSC-T6細(xì)胞ERK1/2蛋白磷酸化表達(dá)降低,抑制在30分鐘時(shí)達(dá)到高峰,與空白對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而HCPT與PD98059兩組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論:HCPT可以抑制PDGF刺激的大鼠肝星狀細(xì)胞的增殖和α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型