紅景天甙對乙醛刺激的大鼠肝星狀細胞Wnt信號通路的影響及其意義.pdf

1、目的：肝纖維化是各種慢性肝病發(fā)展到肝硬化的中間可逆階段。在肝纖維化的病程中,肝星狀細胞(hepatic stellate cells HSCs)的活化是其核心環(huán)節(jié),因此對肝星狀細胞的活化進行干預是臨床治療肝纖維化的發(fā)展方向。由于肝星狀細胞的活化涉及眾多的細胞信號傳導通路,因此了解肝星狀細胞的活化中各種信號通路的作用機制十分重要。引起肝星狀細胞活化的病因很多,乙醛是酒精性肝病中作用于HSCs的致病因子,將乙醛作為HSCs的激活劑在各種實驗

2、中廣泛運用。乙醛刺激大鼠HSCs活化的主要特點是增殖速度增快和包括α1膠原(α1(Ⅰ)collagen)在內(nèi)的細胞基質(zhì)分泌增多。在前期的實驗中,紅景天甙已經(jīng)被證實可以影響肝星狀細胞活化過程中的TGFβ-Smad和Rho-ROCK信號通路從而抑制HSCs的激活和過量細胞基質(zhì)的產(chǎn)生,但是對其抑制HSCs增殖的具體分子機制仍然不是很明確。近年對Wnt信號通路的研究發(fā)現(xiàn):它通過對目的基因MYC、CyclinD1等的轉錄調(diào)控影響細胞的增殖和轉化,

3、并與肝星狀細胞的活化密切相關。因此了解紅景天甙對活化的肝星狀細胞中Wnt信號通路和細胞活性的影響對研究紅景天甙的藥理作用和治療肝纖維化的分子機理具重要意義。本研究項目通過觀察紅景天甙處理乙醛刺激的大鼠肝星狀細胞生長速度的變化以及細胞中Wnt信號通路中主要下游分子及目的基因mRNA表達和蛋白水平的改變,探討Wnt信號通路在肝星狀細胞活化中的作用。
　　 方法用紅景天甙和乙醛處理體外培養(yǎng)的大鼠肝星狀細胞,同時用正常培養(yǎng)細胞和單以乙醛

4、刺激的細胞為對照[1],由MTT法繪制細胞生長曲線并對比,采用RT-PCR和Western-blot的方法分別從mRNA水平和蛋白水平觀察Wnt信號通路相關指標β-catenin和細胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表達變化,并用統(tǒng)計方法進行對比分析。
　　 結果從各組細胞生長曲線的對比可以清晰發(fā)現(xiàn):單用乙醛刺激可使大鼠肝星狀細胞增殖速度增快,紅景天甙可以明顯降低大鼠肝星狀細胞在乙醛刺激后的生長和增殖速度。運用RT-PCR和W

5、estern-blot的方法,在單用乙醛組的大鼠肝星狀細胞中,發(fā)現(xiàn)Ⅰ型膠原[2]、Wnt信號通路中β-catenin(β-鏈蛋白)和細胞周期蛋白D1(cyclinD1)的mRNA表達和蛋白合成相對于正常細胞均增強(P＜0.05),在紅景天甙處理組的大鼠肝星狀細胞中,細胞周期蛋白D1(cyclinD1)和β-catenin(β-鏈蛋白)的mRNA表達和蛋白合成相較于單用乙醛組均出現(xiàn)不同程度的下降(P＜0.05)。
　　 結論 Wn