塞來昔布對結(jié)締組織生長因子誘導(dǎo)腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的作用.pdf

1、背景： 腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibbrosis，RIF)幾乎是所有腎臟疾病進展到終末期腎衰竭(end-stage renal disease，ESRD)的共同途徑。肌纖維母細胞(myofiroblast，MyoF)的形成是間質(zhì)纖維化的關(guān)鍵步驟，它是間質(zhì)纖維化發(fā)生的重要效應(yīng)細胞。它的來源尚未完全清楚，但傾向于主要由腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化(tubular epithelial-myofibroblast

2、 transdifferentiation,TMET)而來。α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)是肌成纖維細胞的標志性蛋白。已經(jīng)證實結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)可以誘導(dǎo)腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化(TMET)。抑制細胞轉(zhuǎn)分化可能是治療纖維化的途徑之一。本實驗中，我們研究塞來昔布(celecoxib)對腎小管上皮轉(zhuǎn)分化的作用，為臨床防治腎間質(zhì)纖維化及終末期腎臟疾病提供理論與實驗依據(jù)。

3、 方法： 將體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細胞(HK-2)分為空白對照組、不同劑量塞來昔布對照組、不同劑量CTGF誘導(dǎo)組、及不同劑量塞來昔布抑制組。每組設(shè)三個復(fù)孔，培養(yǎng)48小時。應(yīng)用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)；通過間接免疫熒光方法觀察肌成纖維細胞特異性標志物α-SMA的表達；以流式細胞術(shù)測量α-SMA陽性細胞百分數(shù)和平均熒光強度；以ELISA法測定上清液中PGE2的含量；應(yīng)用Western blot法檢測α-SMA的表達。 結(jié)果

4、： ①塞來昔布對照組的細胞形態(tài)學(xué)、α-SMA的表達及上清液中PGE2的含量等與對照組無統(tǒng)計學(xué)差別(P＞0.05)；②CTGF誘導(dǎo)組腎小管上皮細胞從原有典型的上皮細胞轉(zhuǎn)分化為長梭形肌成纖維細胞樣細胞；免疫熒光可見大量細胞表達α-SMA；α-SMA陽性細胞百分數(shù)及α-SMA表達的平均熒光強度(MCF)均明顯增加(P＜0.05)；上清液中PGE2的含量增加(P＜0.05)；α-SMA蛋白的表達較其他各組明顯增加(P＜0.05)；③塞來

5、昔布明顯抑制了CTGF誘導(dǎo)的細胞形態(tài)學(xué)改變；α-SMA陽性細胞百分數(shù)及α-SMA表達的平均熒光強度(MCF)均明顯下降(P＜0.05)，呈劑量依賴；抑制α-SMA的表達(P＜0.05)；并不同程度地抑制CTGF的促PGE2增多作用(P＜0.05)。 結(jié)論： CTGF可誘導(dǎo)腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化，并促進PGE2的合成，塞來昔布能抑制CTGF誘導(dǎo)的TEMT的作用，減少PGE2的合成，對腎間質(zhì)纖維化有負性調(diào)節(jié)作用，其作用途徑可能