基于釕配合物的熒光傳感平臺用于癌癥相關(guān)miRNA的檢測研究.pdf

1、癌癥(cancer)是對人類健康危害性極大的一類疾病。近年來，癌癥的發(fā)病率和死亡率一直在增加，使其成為世界上主要的公共健康問題之一。迄今為止，雖然針對癌癥的診斷和治療方法眾多，但是絕大部分患者出現(xiàn)了診斷即晚期的情況，癌癥的早期診斷和預(yù)防對癌癥患者的治療和預(yù)后意義重大。因此，尋找快速、高效的癌癥早期診斷方法已逐步成為研究者的關(guān)注熱點。
　　miRNA(微RNA)是一類由18到25個核苷酸組成的短鏈非編碼單鏈核酸分子，大量研究表明mi

2、RNA在調(diào)控人體機能方面發(fā)揮著重要作用。更為重要的是，miRNA的表達與很多人類疾病的產(chǎn)生密切相關(guān)（尤其是癌癥），其表達紊亂可能揭示癌癥的發(fā)生，miRNA可以作為癌癥早期診斷生物標(biāo)記物。目前臨床檢測miRNA常用方法(Northen印跡、qPCR、基因芯片技術(shù)等)在應(yīng)用過程中均存在時間較長、操作復(fù)雜等缺點。近年來熒光光譜檢測法因其操作簡便、花費低廉、靈敏度及選擇性較高等優(yōu)點引發(fā)了研究熱潮。
　　近年來，我們課題組一直從事于金屬有機

3、骨架(MOFs)用于DNA/RNA檢測研究。MOFs結(jié)構(gòu)種含有芳香環(huán)且?guī)в姓姾傻慕饘訇栯x子，已經(jīng)證明這種骨架可通過π-π堆積和靜電作用與帶有熒光標(biāo)記基團探針DNA(probe DNA，P-DNA)結(jié)合，并對其產(chǎn)生熒光淬滅。形成的復(fù)合體系可以用作疾病相關(guān)核酸序列的檢測，如埃博拉病毒RNA和艾滋病病毒DNA序列。基于多吡啶的釕配合物具有良好的水溶性與穩(wěn)定性，同時含有豐富的π體系，其在與核酸相互作用中表現(xiàn)出優(yōu)異的性質(zhì)。根據(jù)核酸檢測的機理，本

4、研究論文合成出一系列釕配合物作為新型檢測材料用于與癌癥相關(guān)miRNA的檢測研究。簡介如下:
　　一、設(shè)計合成了四個釕配合物[Ru(bpy)2(amtp)]Cl2(Ru1)，[Ru(phen)2(amtp)]Cl2(Ru2),[Ru(dmp)2(amtp)]Cl2(Ru3)and[Ru(bpy)2(thtp)]Cl2(Ru4)用于與多種癌癥相關(guān)miR-185檢測研究，實驗結(jié)果表明Ru1-4可通過靜電作用，π-π堆積和氫鍵作用與P-D

5、NA結(jié)合形成P-DNA@Ru檢測平臺，P-DNA@Ru檢測平臺對miR-185的檢測時間均為1min，檢測限分別為0.42nM、0.28nM、0.32nM、0.85nM，該檢測平臺能夠快速、靈敏及特異性的完成對miR-185的檢測。
　　二、因為miR-185與多種癌癥相關(guān)，對特定癌癥的檢測特異性不高，因此本章針對乳腺癌中表達上調(diào)的生物標(biāo)記物miR-221和miR-222作為研究對象;在Ru1基礎(chǔ)上進行優(yōu)化設(shè)計得到[Ru(bpy)

6、2(hdppz)]Cl2(Ru5)和[Ru(bpy-NH2)2(amtp)]Cl2(Ru6)。實驗結(jié)果表明Ru5和Ru6與FAM或ROX標(biāo)記的P-DNA可以通過靜電作用，π-π堆積和氫鍵作用結(jié)合并使之熒光淬滅。形成的P-DNAs@Ru檢測平臺對miRNA的單獨和同步檢測效果都要優(yōu)于Ru1，二者同步檢測時間分別為1min和2min，檢測限分別為0.20nM，0.52nM和0.28nM，1.03nM，兩種miRNA在檢測過程中互不干擾。