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文檔簡介
1、目的:探討賴氨大黃酸(RHL)對大鼠膽汁淤積性肝纖維化的抑制作用,進一步闡明其作用的可能分子機制;在體內(nèi)實驗基礎(chǔ)上體外培養(yǎng)人肝星形細胞(HSC)株,探討RHL抑制HSC增殖的可能作用機制;為RHL防治膽汁淤積性肝纖維化的研究提供實驗依據(jù)。
方法:1、體內(nèi)試驗:(1)隨機將42只大鼠分為假手術(shù)組、模型組、35 mg·kg-1、70 mg·kg-1RHL治療組、大黃酸組及賴氨酸組,每組7只,采用膽總管結(jié)扎(BDL)手術(shù)建立膽汁淤積
2、性肝纖維化大鼠模型。(2)使用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血清中天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽汁酸(TBA)、總膽紅素(TBIL)水平。(3)HE染色對各組大鼠肝臟組織行病理學檢查;Masson三色染色觀察各組大鼠肝組織纖維組織含量與分布;使用試劑盒通過酶標儀測定各組大鼠肝組織中羥脯氨酸(Hyp)水平;免疫組織化學染色檢測各組大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達部位。(4)RT-PCR檢測各組大鼠肝組
3、織中轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)和α-SMA mRNA表達水平;Western blotting檢測各組大鼠肝組織中TGF-β1和α-SMA蛋白相對表達量。2、體外實驗:(1)體外培養(yǎng)HSC-LX2細胞,實驗分成對照組、50μmol·l-1、100μmol·l-1和150μmol·l-1 RHL用藥組。(2)采用CCK-8法檢測不同濃度的RHL對HSC-LX2細胞活化和增殖的抑制作用。(3)Western blotting檢測用不同
4、濃度的RHL處理48小時后HSC-LX2細胞中TGF-β1和α-SMA蛋白相對表達量。
結(jié)果:1、體內(nèi)試驗:(1)與假手術(shù)組比較,模型組大鼠肝臟質(zhì)量與體質(zhì)量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞,膽管顯著增生并伴纖維大量增生;Hyp水平升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),免疫組織化學染色顯示α-SMA著色于胞膜和胞漿且表達增多;RT-PCR和Wester
5、n blotting結(jié)果顯示模型組大鼠TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表達水平升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(2)與模型組比較,35、70 mg·kg-1RHL治療組和大黃酸組,大鼠肝臟質(zhì)量與體質(zhì)量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);肝臟病理組織學檢查提示35、70 mg·kg-1RHL治療組和大黃酸組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)尚完整,膽管增生,纖維組織沉積減少;Hyp水平減低,差
6、異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);RT-PCR和Western blotting結(jié)果顯示35、70 mg·kg-1RHL治療組和大黃酸組大鼠TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表達水平降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)與大黃酸組比較,35、70 mg·kg-1RHL治療組大鼠肝臟質(zhì)量與體質(zhì)量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);肝臟病理組織學檢查提示35、70 mg·kg-1
7、RHL治療組大鼠肝組織中膽管增生減少,纖維沉積減少;Hyp水平減低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);RT-PCR和Western blotting結(jié)果顯示35、70 mg·kg-1RHL治療組大鼠TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表達水平降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。2、體外實驗:(1)CCK-8結(jié)果顯示,與細胞對照組比較,50μmol·l-1、100μmol·l-1和150μmol·l-1 RHL用藥組HSC-LX2
8、細胞的增殖明顯被抑制,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(2)Western blotting結(jié)果顯示,與對照組比較,50μmol·l-1、100μmol·l-1、150μmol·l-1 RHL用藥組處理HSC-LX2細胞48小時后細胞中TGF-β1和α-SMA蛋白表達水平降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結(jié)論:1、RHL可減輕膽汁淤積性肝纖維化模型大鼠的肝臟損傷,抑制模型大鼠的肝纖維化進程。2、RHL能下調(diào)大鼠細胞
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