KLF4抑制人肝星形細(xì)胞LX-2增殖及活化作用研究.pdf

1、目的：肝星形細(xì)胞（Hepatic stellate cell，HSC）是肝纖維化進(jìn)程的核心環(huán)節(jié)，早期肝纖維化尚可逆轉(zhuǎn)至正常，此逆轉(zhuǎn)過程與肝星形細(xì)胞的狀態(tài)密切相關(guān)。KLF4已被證明在多種生理和病理過程中發(fā)揮基礎(chǔ)性作用。本實(shí)驗(yàn)通過研究Krüppel樣因子4（Krüppel-like factor4，KFL4）對(duì)人肝星形細(xì)胞LX-2細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞凋亡以及對(duì)HSC靜息活化狀態(tài)表型的影響，探討KLF4在維持肝星形細(xì)胞靜息狀態(tài)中的作用，為肝纖維

2、化的診治和預(yù)后判斷提供理論依據(jù)。
　　方法：設(shè)計(jì)KLF4慢病毒載體及KLF4shRNA慢病毒載體,利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)上調(diào)和沉默LX-2細(xì)胞KLF4表達(dá)，篩選轉(zhuǎn)然后穩(wěn)定過表達(dá)和低表達(dá)KLF4的LX-2細(xì)胞進(jìn)行平板克隆、CCK8實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖活性；通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測穩(wěn)定過表達(dá)和低表達(dá)KLF4的LX-2細(xì)胞凋亡率；通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測穩(wěn)定過表達(dá)KLF4的LX-2細(xì)胞細(xì)胞周期分布；通過Western-blot技術(shù)檢測穩(wěn)定過表達(dá)KLF4

3、的LX-2細(xì)胞HSC靜息及活化狀態(tài)各指標(biāo)。
　　結(jié)果：體外TGF-β誘導(dǎo)培養(yǎng)LX-2細(xì)胞24h后，KLF4mRNA水平顯著性下調(diào)（P<0.05）；上調(diào)KLF4，LX-2細(xì)胞增殖能力顯著性下降（P<0.05）,G0-G1期細(xì)胞顯著增加（P<0.05），S期細(xì)胞顯著減少（P<0.05），細(xì)胞凋亡顯著性減少（P<0.05），靜息狀態(tài)HSC標(biāo)志物E-cadherin、ZO-1顯著性上調(diào)（P<0.05），活化狀態(tài)HSC標(biāo)志物N-cadher