Kruppel樣因子4基因klf4在大鼠肝再生中作用研究.pdf

1、klf4作為誘導iPS細胞的轉錄因子已成為研究領域的熱點，其在調控細胞增殖、分化、胚胎發(fā)育等生命過程中均發(fā)揮重要作用。
　　 為了探討klf4過量或降低表達對肝臟再生的作用，本文以大鼠再生肝為材料，參照klf4的mRNA序列信息設計克隆引物和帶酶切位點引物，采用分子克隆技術得到klf4的克隆載體，測序證實正確后，以其為模板，進一步將基因克隆到真核表達載體pEGFP-N1上，構建出表達載體pEGFP-N1-klf4;另外，同樣參照

2、klf4的mRNA序列信息，利用銳博、Genesil、Ambion和QIAGEN等網(wǎng)站的在線設計工具，查閱siRNA設計相關論文，針對klf4mRNA的2個區(qū)域合成寡聚核苷酸片段連接到干涉載體pGenesil-1.0上，構建出2個干涉klf4mRNA的干涉載體pGenesil-1.0-k814和pGenesil-1.0-k1082;同樣，雙酶切表達載體pEGFP-N1-klf4得到klf4的ORF，將其連接到干涉載體pGenesil-1

3、.0-k814和pGenesil-1.0-k1082上，構建出干涉載體對應的檢驗載體pGenesil-1.0-k814-klf4和pGenesil-1.0-k1082-klf4。測序證實正確后，將klf4構建到干涉載體中，完成干涉載體對應檢驗載體pGenesil-1.0-k814-klf4和pGenesil-1.0-k1082-klf4的構建；利用構建的klf4的表達載體、干涉載體和檢驗載體，采用尾靜脈液壓轉基因法，分別將構建的3組載體

4、注入大鼠體內，熒光顯微技術、統(tǒng)計學方法和常規(guī)組織學技術檢測轉klf4后大鼠死亡率、肝指數(shù)和肝組織形態(tài)結構的變化。
　　 經(jīng)測序和電泳檢測證實，本論文成功構建了klf4的表達載體、干涉載體和檢驗載體。運用尾靜脈液壓轉基因法進行klf4基因添加或RNA干涉研究klf4在大鼠肝再生中作用發(fā)現(xiàn)，目的質粒的肝內表達動力學與載體作用檢測結果一致，說明目的片段成功表達。轉入pEGFP-N1-klf4質粒后大鼠死亡率正常，肝指數(shù)在120h略有升