2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  1.通過(guò)離體培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞,觀察P物質(zhì)對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化作用,包括細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和對(duì)IL-1β和IL-10釋放量的檢測(cè)。
  2.通過(guò)P物質(zhì)作用于離體培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞,觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+濃度的變化,探討活化可能的機(jī)制。
  方法:
  1.取出生24 h以內(nèi)的SD乳鼠原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞。將培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞分為5組:(1)對(duì)照組,細(xì)胞孵育全培液;(2)全培液+P物質(zhì)30 nM組;

2、(3)全培液+P物質(zhì)100 nM組;(4)全培液+P物質(zhì)300 nM組;(5)全培液+P物質(zhì)1000 nM組。各組細(xì)胞分別在孵育2h、6h、12h、24h后收集細(xì)胞上清液同時(shí)保留細(xì)胞,以便進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
  2.采用免疫細(xì)胞熒光法鑒定GFAP陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞,并觀察P物質(zhì)孵育后星形膠質(zhì)細(xì)胞在各濃度以及各時(shí)間點(diǎn)的形態(tài)變化。
  3.采用ELISA的方法檢測(cè)P物質(zhì)孵育后星形膠質(zhì)細(xì)胞在各濃度及各時(shí)間點(diǎn)釋放IL-1β和IL-10的

3、情況。
  4.利用比例高內(nèi)涵成像系統(tǒng)的胞內(nèi)鈣離子成像技術(shù)觀察P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后,其胞內(nèi)Ca2+濃度的變化。
  結(jié)果:
  1.培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的鑒定:經(jīng)免疫細(xì)胞熒光法鑒定,培養(yǎng)的細(xì)胞為GFAP陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞。用DAPI復(fù)染后,證實(shí)細(xì)胞的純度達(dá)95%以上。
  2.P物質(zhì)孵育星形膠質(zhì)細(xì)胞后的形態(tài)學(xué)改變:以細(xì)胞孵育全培液作為對(duì)照組。30 nM的P物質(zhì)孵育星形膠質(zhì)細(xì)胞后的2 h、6 h、12 h、24

4、 h分別與之比較,其形態(tài)幾乎無(wú)變化。100 nM的P物質(zhì)孵育星形膠質(zhì)細(xì)胞后的6 h,部分細(xì)胞的胞體開(kāi)始變大變圓,突起回縮,呈現(xiàn)出活化的形態(tài)學(xué)表現(xiàn),且隨著時(shí)間的延長(zhǎng),至12 h發(fā)生這種形態(tài)變化的細(xì)胞數(shù)目逐漸增多,GFAP的免疫染色也增強(qiáng)。300 nM的P物質(zhì)孵育星形膠質(zhì)細(xì)胞后的6 h、12 h,呈現(xiàn)活化態(tài)的細(xì)胞數(shù)目均較100 nM組增加,此外GFAP的免疫染色也較100 nM組增強(qiáng)。1000 nM的P物質(zhì)孵育星形膠質(zhì)細(xì)胞后2 h,細(xì)胞形態(tài)

5、開(kāi)始出現(xiàn)上述變化,但至6 h、12 h時(shí)GFAP的免疫染色均低于100 nM、300 nM組。100 nM、300 nM組的星形膠質(zhì)細(xì)胞在孵育至24 h時(shí)GFAP的免疫染色均較12 h時(shí)減弱。
  3.IL-1β的檢測(cè)結(jié)果:以細(xì)胞孵育全培液組的細(xì)胞上清液作為對(duì)照組。30 nM的P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后的2 h、6 h、24 h,細(xì)胞上清液中的IL-1β含量與對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而12 h細(xì)胞上清液中的IL-1β含量高于

6、對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。100 nM、300 nM的P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后的2 h、6 h、12 h,細(xì)胞上清液中的IL-1β含量較對(duì)照組增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而24 h細(xì)胞上清液中的IL-1β含量與對(duì)照組相比,差異不再有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后,促進(jìn)其釋放IL-1β,而且具有特定的時(shí)間過(guò)程。30 nM的P物質(zhì)促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放IL-1β的作用在12 h最明顯,至24 h該作用消失。100 nM、300 nM

7、的P物質(zhì)促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放IL-1β的作用在2 h開(kāi)始,在6 h作用最強(qiáng),之后隨著時(shí)間的延長(zhǎng),該作用逐漸減弱,至24 h該作用幾乎消失。
  4.IL-10的檢測(cè)結(jié)果:以細(xì)胞孵育全培液組的細(xì)胞上清液作為對(duì)照組。30 nM、100 nM、300 nM的P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后的2 h、6 h,細(xì)胞上清液中的IL-10含量與對(duì)照組相比均減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。30 nM、100 nM、300 nM的P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后的12

8、 h,細(xì)胞上清液中的IL-10含量與對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。30 nM、100 nM、300 nM的P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后的24 h,細(xì)胞上清液中的IL-10含量與對(duì)照組相比增加,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞的最初2 h和6 h內(nèi),抑制其釋放IL-10。然而隨著時(shí)間的延長(zhǎng),P物質(zhì)對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放IL-10的抑制作用逐漸減弱。
  5.胞內(nèi)鈣離子成像結(jié)果:以細(xì)胞孵育Hanks液作為對(duì)照組,60 mM的

9、kcl用于檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞的功能活性。30 nM、100 nM、300 nM、1000 nM的P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后,其胞內(nèi)鈣離子的濃度與對(duì)照組相比均增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。100 nM的P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后,其胞內(nèi)鈣離子的濃度高于30 nM、300 nM、1000 nM的P物質(zhì)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。300 nM的P物質(zhì)作用后,星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的濃度高于30 nM、1000 nM的P物質(zhì)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而1000 n

10、M的P物質(zhì)作用后,星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的濃度與30 nM的P物質(zhì)相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上說(shuō)明,P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后,其胞內(nèi)鈣離子的濃度升高。其中,以100 nM的P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后引起的胞內(nèi)鈣離子濃度的升高最為顯著。
  結(jié)論:
  1.P物質(zhì)能夠誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞呈現(xiàn)出活化態(tài)形態(tài)改變。
  2.P物質(zhì)能夠促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放促炎因子IL-1β,抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放抗炎因子IL-10。
  3.P

11、物質(zhì)對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化作用可持續(xù)約12 h,至24 h時(shí)該作用減弱甚至消失。
  4.P物質(zhì)作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞后,其胞內(nèi)鈣離子的濃度升高。100 nM P物質(zhì)的作用最強(qiáng)。
  5.P物質(zhì)誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化參與疼痛的形成,可能與鈣離子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活以及促進(jìn)其釋放IL-1β并抑制其釋放IL-10有關(guān)。
  慢性神經(jīng)病理性疼痛是由軀體感覺(jué)神經(jīng)系統(tǒng)的損傷造成的,其主要表現(xiàn)為異常的痛感受,包括觸誘發(fā)痛(正常非傷害性刺激引

12、起的疼痛)和痛覺(jué)過(guò)敏(對(duì)傷害性刺激過(guò)度的痛反應(yīng))。慢性疼痛可以持續(xù)數(shù)月,給病人帶來(lái)極大痛苦,而臨床上也缺乏有效的治療手段。以往痛覺(jué)幾十年的研究取得了巨大的成就,對(duì)痛覺(jué)的中樞區(qū)域、不同中樞的功能作用及相互聯(lián)系、局部的神經(jīng)環(huán)路、痛覺(jué)感受器的感受機(jī)制、參與痛覺(jué)傳遞的神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)等有了深入了解。但既往的研究主要關(guān)注神經(jīng)元、神經(jīng)元構(gòu)成的環(huán)路及神經(jīng)遞質(zhì)的作用。而且基于上述研究結(jié)果設(shè)計(jì)的藥物也是以參與痛覺(jué)傳遞的神經(jīng)元為靶標(biāo),雖有一定療效但對(duì)慢性疼痛的

13、治療效果并不理想。近些年神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在痛信號(hào)產(chǎn)生、傳遞、痛覺(jué)形成中的重要作用被逐漸予以重視,已經(jīng)成為痛覺(jué)研究及治療的重要靶點(diǎn)。
  在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)目遠(yuǎn)多于神經(jīng)元,越來(lái)越多的資料顯示膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)生理及病理?xiàng)l件下的功能作用非常重要。研究發(fā)現(xiàn)疼痛模型的動(dòng)物在慢性疼痛發(fā)生時(shí)伴隨有脊髓內(nèi)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的活化,表現(xiàn)為胞體肥大,樹(shù)突回縮,表面標(biāo)記蛋白表達(dá)增多等現(xiàn)象。鞘內(nèi)或者全身應(yīng)用神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞代謝抑制劑后,膠質(zhì)細(xì)胞活化減弱,同時(shí)

14、慢性疼痛癥狀也得到緩解。這些結(jié)果均提示,慢性疼痛的形成與脊髓神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的活化相關(guān)。但由于神經(jīng)系統(tǒng)是由神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成的復(fù)雜環(huán)路,常規(guī)的疼痛研究模型無(wú)法對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行深入、系統(tǒng)的觀察,其研究結(jié)論也難以排除神經(jīng)元的影響。因此神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在疼痛信號(hào)產(chǎn)生、傳遞過(guò)程的作用及機(jī)制,如膠質(zhì)細(xì)胞如何活化,活化后如何發(fā)揮作用等并不明確。
  研究表明,痛模型的大鼠在損傷部位應(yīng)用局部麻醉藥利多卡因之后脊髓內(nèi)GFAP的表達(dá)減少,而GFAP

15、是星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異標(biāo)記蛋白,這些結(jié)果表明,傷害性刺激通過(guò)神經(jīng)元繼而引起中樞神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的激活。提示經(jīng)神經(jīng)元向脊髓傳遞的傷害性信號(hào)可能是星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的啟動(dòng)因素。
  外周感覺(jué)神經(jīng)元向脊髓傳遞感覺(jué)信號(hào)的物質(zhì)基礎(chǔ)是神經(jīng)遞質(zhì),P物質(zhì)屬于速激肽家族,是脊髓水平傳遞痛信號(hào)特異的神經(jīng)遞質(zhì)。NK1受體是P物質(zhì)的特異性受體,研究發(fā)現(xiàn)NK1受體在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞也有分布。常規(guī)在體實(shí)驗(yàn)結(jié)果是基于神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)所獲得的,這種方式無(wú)法明確P物質(zhì)對(duì)星

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